[发明专利]一种蛋白修饰的方法在审
| 申请号： | 201910624363.5 | 申请日： | 2019-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN110468173A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 熊海;肖秋芸;赵烜 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/47 |
| 代理公司： | 44268 深圳市君胜知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 王永文;刘芙蓉<国际申请>=<国际公布> |
| 地址： | 518060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种蛋白修饰的方法，包括：提供包含目标蛋白基因序列的载体，对目标蛋白基因序列中的编码氨基酸的密码子进行突变；构建非天然氨基酸；分别制备Flexizyme和tRNAsep；利用Flexizyme将非天然氨基酸与上述tRNAsep进行连接，获得ThioAcX‑tRNA；将ThioAcX‑tRNA和经密码子突变的目标蛋白加入PURE EXPRESS蛋白表达系统进行反应，获得修饰后的蛋白产物。本发明通过在体外蛋白翻译体系中加入预组装了非天然氨基酸的转运RNA，利用密码子抑制原理，可以对较大的蛋白片段进行修饰，极大的缩短了反应时间，降低了成本，并可同时完成两种甚至多种蛋白在同一体系中的合成。 | ||
| 搜索关键词： | 非天然氨基酸 目标蛋白基因 密码子 修饰 蛋白表达系统 体外蛋白翻译 编码氨基酸 密码子突变 蛋白产物 蛋白片段 蛋白修饰 目标蛋白 同一体系 预组装 构建 制备 转运 突变 蛋白 合成 | ||
【主权项】：
1.一种蛋白修饰的方法，其特征在于，包括步骤：/nA、提供包含目标蛋白基因序列的载体，对所述目标蛋白基因序列中的编码氨基酸的密码子进行突变；/nB、对天然氨基酸进行修饰，构建非天然氨基酸；/nC、分别制备Flexizyme和tRNAsep；/nD、构建体外酯化反应体系，利用上述Flexizyme将非天然氨基酸与上述tRNAsep进行连接，获得ThioAcX-tRNA酯化产物，其中X为任意氨基酸；/nE、将上述ThioAcX-tRNA和经密码子突变的目标蛋白加入PURE EXPRESS蛋白表达系统进行反应，获得修饰后的蛋白产物。/n
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