一种解淀粉芽孢杆菌添加前体物TCA（1,2,4‑三氮唑‑3‑羧甲酰胺）发酵法生产抗病毒药物利巴韦林的生产工艺，即利用自行构建的兼具高效生产核苷和高效表达嘌呤核苷磷酸化酶这两种特点的基因工程菌RBVM（pBSA43‑Bs816PNP）通过发酵过程中添加前体物TCA实现发酵法生产利巴韦林，具体工艺包括：A.利用分子生物学技术以鸟苷生产菌解淀粉芽孢杆菌TA208作为宿主菌构建兼具高效表达嘌呤核苷磷酸化酶（PNPase）的基因工程菌RBVM（pBSA43‑Bs816PNP）：即利用PCR技术从枯草芽孢杆菌BS168中扩增低分子量嘌呤核苷磷酸化酶编码基因pupG，与经过改造的表达载体pBSA43连接，构建了具有较高表达效率和很高质粒稳定性的分泌型表达载体pBSA43‑Bs816PNP和工程菌RBVM（pBSA43‑Bs816PNP）；B.工程菌添加前体物发酵：将步骤A中获得的经扩大培养的菌种RBVM（pBSA43‑Bs816PNP）接入发酵培养基进行工程菌添加前体物发酵，发酵培养基中碳源含量应为8%～12%，氮碳比N:C应介于10：100～15：100之间，无机盐含量应为0.1%～12%，发酵培养基的初始pH7.2～7.8，培养温度33℃～35℃，振荡培养或发酵罐培养60～80h，接种量为5%～10%V/V，发酵过程中，添加氨水调节发酵液的pH值维持在7.0～7.4，发酵开始12‑24h添加TCA。