本专利网">发明公开了一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法,属水产养殖领域。以前,雨生红球藻采用环形跑道式水泥池或光生物反应器培养,虾青素产率低,易污染,工艺复杂,操作麻烦,基建投资大,成本高。本发明采用二阶段养殖法,第一阶段在三角烧瓶中培养,设置较低的温度和光照强度,有利于藻细胞生长且避免强光对细胞造成光伤害,第二阶段采用白塑料桶充气培养,提高了温度和光照强度并延长了光照时间,有利于虾青素积累。本发明还对传统培养液配方进行了优化,营养更全面、均衡,成本低,操作灵活、方便,虾青素产量提高120%。
1.一种胁迫雨生红球藻快速积累虾青素的方法,其特征在于具体步骤如下:步骤(1)培养液的准备培养液成分:Ca(NO3)20.4份,NaH2PO40.1份,MgSO4·7H2O 0.05份,CuSO4·5H2O 0.02份,MnCl2·4H2O 0.1份,FeSO4·7H2O 0.04份,尿素0.5份,人尿1份,泛酸钙0.03份,麦饭石粉0.04份,α‑萘乙酸0.002份,肌醇0.001份,叶酸0.004份,尼古丁酸0.001份,维生素H 0.008份,EDTA 0.04份,土壤浸出液1.2份,冷开水1000份;装入棕色磨口塞试剂瓶中,摇匀,密封,置入4℃冰箱保存备用;步骤(2)三角烧瓶培养取一3000毫升三角烧瓶,加入1500毫升步骤1所述培养液,选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的雨生红球藻藻种接种,接种要在上午9‑10点进行,接种密度4万个细胞/每毫升,轻轻摇匀,报纸和橡皮筋封口,放在微藻培养室中进行培养,空调控温,日光灯管提供光照,不充气,调节温度至26℃,光照强度至5000lux,光暗周期=12h/L+12h/D,即提供间歇光,12小时光照,12小时黑暗,每天手动摇瓶3次,每次45秒钟,连续培养7天,转入下一步骤;步骤(3)白塑料桶培养取一65升带盖的大口白塑料桶,市场有售,加入步骤1所述培养液40升,再加入步骤2连续培养7天的藻液1800毫升,轻轻摇动3分钟,盖上盖子,进行培养;盖子上打上2个孔,每个孔直径10毫米,插入2根管子,一根为塑料管,长3米,直径8毫米,一端连接空气压缩机,另一端插入到藻液底部,用以充气,充入混合气体,气体成分=空气98%+纯CO22%,连续不间断充气,气量不宜太大,以让藻细胞浮起不下沉即可;另一根较短,长30厘米,直径10毫米,为比较硬的料管,用以排气;将此塑料桶放入微藻培养室中培养,室内空调控温,日光灯管照明,以打开灯管的数量多少来控制光照强度,提供连续不间断光照,连续培养8天,前4天调节温度至28℃,光照强度18000lux,因塑料桶壁的阻挡和吸收作用,到达藻液的实际光照强度为12000lux,后4天,调节温度至30℃,光照强度20000lux,后转入下一步骤;步骤(4)藻细胞收集取步骤3藻液1000份,加入0.5份甲壳素,充分搅拌15分钟,再加入0.8份明矾,搅拌20分钟,静置、沉淀36小时,弃上清液,取底部红色藻泥,藻细胞收集完毕;步骤1中所述土壤浸出液制备方法:取树林中松散、富含有机质的上层土壤1千克,加自来水5升,煮沸20分钟,将泥浆倒入烧杯中,静置24小时,后吸取上清液,倒入三角烧瓶中,加棉花塞,煮沸15分钟,冷却,静置沉淀12小时,取上清液即得土壤浸出液,装入磨口塞试剂瓶,密封,贴上标签,置于4℃冰箱备用;步骤1中所述人尿制备方法:取一3000毫升三角烧瓶,装入人尿1500毫升,静置,自然发酵48小时,放在电炉上加热,煮沸3分钟,冷却,装入磨口塞棕色试剂瓶,密封,置于4℃冰箱冷藏备用;接种用的雨生红球藻预先进行提纯,以确保接种时藻种为纯种且处于生长旺盛的指数生长期;步骤1中各种营养盐要按配方中提供的顺序加入,以免发生化学反应;步骤1中各种无机营养盐和维生素预先配成母液且置于4℃冰箱冷藏保存备用,放置时间不要超过30天;步骤1和2中所用三角烧瓶等玻璃仪器均需洗刷干净放在85℃烘箱中烘干后使用;步骤2所述接种过程需在上午9‑10点且在无菌操作台上进行;步骤3中所用塑料桶要选用透光性好且韧性强度高,以提高光能利用率和塑料桶使用寿命;步骤1中所用化学药品纯度均需化学纯级别。
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