本发明公开了一种用于植物材料梯度脱水的石蜡切片方法,包括样品的采集及固定、样品的脱水、样品的透明、浸蜡、包埋、修块、固定、切片、展片、干燥、脱蜡、封固等步骤。本发明的样品材料经二甲苯透明后,虽然植物体中的叶绿素会完全降解,但植物细胞的细胞壁和细胞核被番红染成红色,而使植物样品呈现红色,经二甲苯透明后,样品的颜色与包埋的石蜡的颜色极易区分,在包埋样品时很容易包埋成需要的样品方向,并且在修块时可以很清楚地看清材料在包埋块中的位置,使修块、切片、展片和镜检操作非常简便,能够避免误伤材料,在镜检时很方便检测到材料的展开程度,进而提高了切片质量和实验效率。
一种用于植物材料梯度脱水的石蜡切片方法,其特征在于,包括以下具体步骤:1)样品的采集及固定:采集新鲜材料浸入固定液中,真空抽气15~20min,然后于固定液中固定24~36h;2)样品的脱水:将固定后的材料依次通过质量分数为30%、50%、70%、85%、90%、100%、100%的梯度乙醇溶液进行脱水,每个梯度的乙醇溶液中分别脱水0.2~2h;3)透明及染色:将脱水后的材料先于1/2无水乙醇与1/2二甲苯与0.05wt%~0.1wt%的番红混合溶液中透明处理10~30min,再于纯二甲苯溶液中透明处理两次,每次处理10min;4)浸蜡与包埋:透明后将材料浸入1/2二甲苯与1/2石蜡混合液中30min,再放入熔点为52~56℃的熔融纯蜡中浸蜡1~2h后,将浸蜡后的材料放入58℃的恒温箱中保温,然后将蜡盒倒满熔融石蜡,用镊子夹取材料移入盒内石蜡中,摆放好,并在蜡面上吹气使蜡的表面凝成薄层,再将蜡盒移入凉水中并将纸盒压入水底,完全凝固后即获蜡块;5)修块及固定:取出包含有材料及蜡块的纸盒,除去包被蜡块周围的纸,露出包含有材料的蜡块,依据材料所处位置,将蜡块切割并修成下宽上窄的梯形,使每个小块包含一个材料,并使上部矩形对边平行,滴几滴融化的蜡于小木块上,将梯形蜡块底部粘贴于小木块上,使其粘贴牢固;6)切片、展片及烘干:将梯形蜡块于转式切片机上进行连续切片,切片厚度为6~10μm,然后将连续切片放入载玻片上,再将置有切片的载玻片放在40~48℃的展片台上,待蜡带完全展开后,倾去多余的水分,室温晾干或置于35℃烘箱中烘干备用;7)脱蜡、复染及封固:将充分干燥的切片放入二甲苯脱蜡处理20~30min,脱蜡后的切片用梯度酒精进行复水、复染及脱水,再过度至纯二甲苯中透明处理2次,每次3~5min,然后捞出载玻片,于材料中部滴一滴加拿大树胶,盖上盖玻片,制成永久制片。
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