本发明属于模拟酶、分析化学技术领域,涉及类过氧化物模拟酶的制备,尤其涉及一种基于负载型Pd/C类过氧化物酶的制备方法及其应用。本发明首先采用模板法和原位还原法制备得到负载型Pd/C类过氧化物酶,然后将定性滤纸置于含有Pd/C类过氧化物酶和TMB的醋酸盐缓冲溶液中浸泡并真空干燥,制得试纸。所述试纸在使用时,先配制一定浓度梯度的过氧化氢溶液,将所得试纸置于溶液中并取出,利用颜色识别器读取试纸上的颜色值R、G、B,并将数据采用组合方式建立与过氧化氢浓度的线性关系,即可用于过氧化氢的检测。本发明所公开的基于Pd/C类过氧化物酶的比色试纸,具有方便携带、操作快速简便、分析成本低的优点,对过氧化氢响应灵敏,有良好的特异性。
1.一种负载型Pd/C类过氧化物酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)配制50 mL质量浓度为2~5%的三乙醇胺水溶液,在80℃下搅拌30 min;(2)将0.76~2.2 g十六烷基三甲基溴化铵和0.336~2.88 g水杨酸钠加入上述溶液中继续搅拌1 h,其中十六烷基三甲基溴化铵和水杨酸钠的摩尔比为1:1~3,再加入6.53~7.93 g正硅酸四乙酯,反应1~4 h,得到的产物用盐酸和甲醇回流,随后离心、洗涤、真空干燥,得到SiO2纳米颗粒;(3)将0.5~1.2 gSiO2纳米颗粒和0.5~4.8 g盐酸多巴胺均匀分散于200 ml pH值为8.5的Tris‑HCl缓冲溶液中,SiO2和盐酸多巴胺的质量比为1:1~4,加入2 ml的0.25 mol/L K2PdCl4在30℃下搅拌10~36 h,得到的产物离心水洗,冷冻干燥,得到Pd/PDA@SiO2复合材料;(4)将所制得的Pd/PDA@SiO2复合材料放入管式炉中,氮气氛中进行碳化,在600~800℃下保持1~2 h,冷却至室温,取出得到负载型Pd/C@SiO2纳米颗粒;(5)将负载型Pd/C@SiO2纳米颗粒加入5%HF溶液中搅拌反应8~20 h,其中所述Pd/C@SiO2纳米颗粒与5%HF溶液的质量体积比为1g:200~400ml,产物离心、水洗、冷冻干燥,得到负载型Pd/C类过氧化物酶。
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