[发明专利]一种十二指肠钩虫抗凝肽及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药及生物技术领域。具体的说，本发明描述了一种新的抗 凝多肽-十二指肠钩虫抗凝肽1(Ancylostoma duodenale anticoagulant peptidel，AdAP1)基因及其编码的蛋白质。本发明还涉及此十二指肠钩虫抗 凝肽及编码此肽的核苷酸的制备和应用。

技术背景

在当前人类疾病中，血栓栓塞性疾病已成为危害人类健康的主要因素， 由血栓栓塞所致的心肌梗死、脑梗死、肺梗死等其死亡总数为各种病因之首， 如何防治该类疾病是目前临床与医药科学研究的热点。尽管有肝素、口服香 豆素、链激酶和尿激酶等药物多年应用的历史，但这些药品的出血、血小板 减少等副作用限制了其应用，因此开发出疗效好、安全性好的血栓性疾病防 治药物倍受关注。目前临床上治疗血栓性疾病的药物主要分为抗血小板类药 物、抗凝血药物和溶血栓药物三大类。其中，抗凝血药是一类阻止血液凝固 的药物，主要用于血栓栓塞性疾病的预防与治疗。

钩虫是寄生于人或动物宿主肠道的吸血寄生虫。钩虫能分泌抗凝物质， 使宿主被钩虫咬附伤口不易凝血，血液并经钩虫消化道迅速排出。1993年， 从犬钩虫(Ancylostoma caninum)中首次分离出抗凝肽。此钩虫抗凝肽被命名 为犬钩虫抗凝肽(Ancylostoma caninum anticoagulant peptide，AcAP)，也称线 虫抗凝血蛋白(nematode anticoagulant protein，NAP)。此后，从犬钩虫及锡 兰钩虫(Ancylostoma ceylanicum)中陆续分离到AcAP5、AcAP6、AcAPc2、 AceAP1、AcAPc3、AcAPc4等抗凝肽[Stanssens P，P W Bergum，Y Gansemans et al.Anticoagulant repertoire of the hookworm Ancylostoma caninum.Proc Natl Acad Sci USA.1996；93：2149～2154；Harssion，L.M.， Nerlinger，r.D.Bungiro et al.Molecular characterization of Ancylostoma inhibitors of coagulation factor Xa.Hookworm anticoagulant activity in vitro predicts parasite bloodfeeding in vivo[J].J.Biol.Chem，2002；277(8)：6223-29； Mieszczanek J，Harrison L M，Vlasuk G P and Cappello M.Anticoagulant peptides from Ancylostoma caninum are immunologically distinct and localize to separate structures within the adult hookworm. Mol Biochem Parasitol. 2004；133(2)，319-323]。钩虫抗凝肽及其重组产物具有明确的抗凝血作用， 其抗凝作用已引起人们的重视并被探讨应用于临床实践。其中，利用酵母表 达系统生产的重组AcAPc2(rAcAPc2，或rNAPc2)和重组(rAcAP5，或 rNAP5)的临床或临床前试验表明它们具有广阔的应用前景，是目前倍受医 药专家关注的正在开发的抗凝抗血栓药物。目前已研究报道的钩虫抗凝肽主 要来自于动物寄生的钩虫一犬钩虫及锡兰钩虫，本发明人首次报道了一种十 二指肠钩虫抗凝肽AduNAP7的原核表达及其抗凝作用(彭礼飞，邓莉，杨陈 等.十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7的原核表达、纯化及抗凝活性鉴定[J]. 中国人兽共患病学报，2007，24(10)：1021-1025)。在发明专利US5,863,894； US5,864,009；US5,866,542；US5,866,543；US5,872,098； US5,945,275；US6,040,441；US6,046,318；US6,087,487；US6,090,916； US6,096,877；US6,121,435；US6,534,629等中可见对钩虫抗凝肽AcaNAP48， AcaNAP23，AcaNAP24，AcaNAP25，AcaNAP44，AcaNAP31，AceNAP4， AcaNAP45，AcaNAP47，AduNAP7，AduNAP4，AceNAP5及AceNAP7的序列 简单描述。