[发明专利]IGF-1基因启动子区微卫星多态性的检测试剂盒无效
| 申请号： | 201410439642.1 | 申请日： | 2014-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104164432A | 公开（公告）日： | 2014-11-26 |
| 发明（设计）人： | 刘蕊;胡丽玲;吴萍;赵立杰;许丹丹 | 申请（专利权）人： | 天津市人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 天津佳盟知识产权代理有限公司 12002 | 代理人： | 侯力 |
| 地址： | 300121 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | igf 基因 启动 子区 卫星 多态性 检测 试剂盒 | ||
【说明书】：
技术领域
本发明涉及一种IGF-1基因启动子区微卫星多态性的检测试剂盒。本试剂盒能对IGF-1基因启动子区微卫星既（CA）重复序列多态性进行检测，尤其可以检测出(CA)重复次数为(19)和(CA)重复次数为非19，以及(CA)重复次数为19的纯合子和杂合子。可以用于糖尿病患者伴随结直肠癌发生的辅助诊断，糖尿病患者临床用药的评估等研究领域。
背景技术
结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)作为最常见的消化道肿瘤之一，在癌症发病率中所占比例高达9%，发病率和死亡率分别居所有癌症的第三位和第四位。其很多研究者也将目光锁定在其研究机制上，流行病学研究发现，糖尿病（Diabetes mellitus,DM）与包括结直肠癌在内的多种恶性肿瘤的发病密切相关。且长期接受胰岛素治疗患者该病发生的危险性增加2-3倍。
关于DM患者伴CRC发生风险增加的机制，有人提出了胰岛素-胰岛素样生长因子（IGF）轴学说，即血清异常增高的胰岛素水平可通过胰岛素-IGF-1轴促进结直肠上皮细胞增殖转化、抑制细胞凋亡导致CRC的发生。而大量研究报道，“高胰岛素血症”及高浓度的IGF-l会增加CRC的发生风险，有meta分析表明IGF-1浓度与大肠癌的发生风险正相关，总OR=1.56 ( 95％CI：1.14-2.13)，血清高水平IGF-1 是大肠癌的独立危险因子。
国外研究报道表明血清IGF-1水平与IGF-1基因启动子CA重复序列有关，IGF-1基因启动子上游约1kb处一段含有11-23个CA重复的多态性微卫星片段，其中19次CA重复的等位基因频率最高，被认为是野生型等位基因。携带(CA)19/19的IGF-1浓度低于其杂合子基因型及其它基因型，所以CA重复次数与IGF-1的浓度相关。有学说认为高胰岛素血症可以通过胰岛素-IGF-1轴促进结直肠上皮细胞增殖转化、抑制细胞凋亡导致CRC的发生，所以非携带(CA)19/19的基因型可能是易受胰岛素影响而导致结直肠癌发生的高危基因型。既携带非(CA)19/19的基因型的糖尿病患伴结直肠癌发生的风险会明显，该基因型可能是易于发生结直肠癌的胰岛素敏感基因型，所以在临床上明确糖尿病患者IGF-1基因启动子（CA）重复序列多态性，确定其基因型，可以对携带胰岛素敏感基因型的糖尿病患者在使用胰岛素上进行评估，为其提供个性化的治疗方案，降低该类糖尿病患者伴结直肠癌发生的风险。所以（CA）重复序列多态性的检测对于避免糖尿病患者伴结直肠癌发生至关重要。
关于（CA）重复序列多态性的检测方法，目前较常用的方法是测序的方法，但是该方法的价格比较昂贵，不适合医院广泛开展，因此必须寻找一种应用简单、结果可靠、
价格低廉的，且适合临床开展的技术来开发IGF-1基因启动子区 (CA）重复序列多态性检测试剂盒以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测IGF-1基因启动子区 (CA）重复序列多态性的试剂盒，以便筛查出糖尿病受试者的基因型是否是易受胰岛素刺激而诱发结直肠癌的高危基因型，可以用于糖尿病患者伴随结直肠癌发生的早期辅助诊断，以及糖尿病患者临床使用药的评估等研究领域。
我们经过与测序等方法的对比评估，选择了PCR-单核苷酸构象多态性技术。
PCR-单核苷酸构象多态性技术是一种直接检测基因突变的分子生物学技术，具有灵敏度高，特异性好，简便，廉价等优点。本发明采用PCR技术，根据单链DNA构象差别，即长度不同或单个核苷酸不同的单链DNA片段空间构象不同，当其在非变性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳时，电泳的位置会不同，根据电泳DNA marker分析不同受试者的基因型。本发明涉及的试剂盒可以广泛用于糖尿病患者（CA）重复序列多态性检测，提高检测的可重复性和准确性，更准确的筛查出易受方案，可以大大地降低医疗成本和费用，减少医疗资源的浪费，对部分患者胰岛素使用进行评估，为其提供个性化的治疗方案，降低其结直肠癌发病风险，提高患者生存质量。
本发明在对GENBANK 上所有已知的IGF-1启动子核酸序列进行比对的基础上，最后选定GENBANK数据库的序列NC_012920为模板设计引物，该引物在含有耐热DNA 聚合酶、高质量的脱氧糖核苷三磷酸(dNTPs) 以及Mg2+ 等的PCR 反应缓冲液中能实现体外扩增出特异性强含 (CA）重复序列大小为150bp左右的扩增产物，扩增物的特异性和准确度经琼脂糖凝胶电泳验证后，将在非变性的聚丙烯酰胺凝胶通过电泳条带位置和数目实现对 (CA）重复序列多态性的检测。
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- 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及猪NR1H3基因过表达载体质粒的构建方法及其表达水平的检测。本发明提供了序列如SEQ ID NO:1‑2所示的用于构建猪NR1H3基因过表达载体质粒的引物，以及猪NR1H3基因过表达载体质粒的构建方法；本发明还提供了序列如SEQ ID NO:3‑4所示的用于检测猪NR1H3基因表达水平的引物，以及检测猪NR1H3基因表达水平的方法。本发明为猪NR1H3基因的功能研究及其应用提供了有效方法和基础。
- 幽门螺杆菌抗生素耐药性分析试剂盒及耐药性检测方法-201510659460.X
- 保志军;董方元;黄一沁;孔咪咪;曾县平;南丽;吴勇;余丁 - 华东医院;宁波海尔施基因科技有限公司
- 2015-10-14 - 2019-09-10 - C12N15/11
- 本发明提供了一种幽门螺杆菌抗生素耐药性分析试剂盒以及利用所述试剂盒进行幽门螺杆菌抗生素耐药性检测的方法，所述试剂盒包括引物，所述引物包括针对幽门螺杆菌抗生素耐药基因以及鉴定基因16S rRNA设计的引物。本发明基于多重基因分析，各诊断基因独立分明，能够实现在同一个反应体系内对幽门螺杆菌的快速鉴定及其多种抗生素耐药性的分析，避免传统培养方法和药敏检测耗时长、阳性率低、费用高等缺点。
- 一种双引物及其应用-201910472273.9
- 汪雪;金柳;王孟强 - 汪雪;上海索境生物科技有限公司
- 2019-05-31 - 2019-09-03 - C12N15/11
- 本发明属于生物技术领域，涉及一种双引物及其应用，具体涉及一种用于滚环扩增/鉴定环形核酸的双引物，其组成的反应体系，其组成的试剂盒及其应用，所述双引物为分散型引物，所述双引物中的第一引物和第二引物的3’端的距离为0‑1000bp，所述双引物能够对环形DNA/RNA进行分子鉴定，所述鉴定方法准确、快速、便捷、直观，为新型环形DNA/RNA的发现提供有效手段。
- 一种校对活性酶抑制剂及其降低抑制作用的方法-201510937671.5
- 戴忠敏;朱晓静;孙淑慧;谢冰花;邱猛生 - 杭州师范大学
- 2015-12-15 - 2019-09-03 - C12N15/11
- 本发明公开了一种校对活性酶抑制剂及降低所述校对活性酶抑制剂在聚合酶链式反应中对校对活性酶活性抑制的方法，所述抑制剂为含有连续或不完全连续的n个G的寡核苷酸，n为大于4的正整数；所述不完全连续为n个G中间含有1个A、T或C；本发明提供一种校对活性酶抑制剂，富含G碱基的寡核苷酸能够抑制具有校对活性的DNA聚合酶的活性，使PCR扩增失败；通过将降低含有所述抑制剂的寡核苷酸浓度(降低至不大于0.1μM)，或者将富含C碱基的寡核苷酸与富含G碱基的寡核苷酸互补配对后能够降低其抑制作用。
- 辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记及其选育方法和应用-201710167093.0
- 王志强;曾文芳;牛良;潘磊;丁义峰;鲁振华;崔国朝 - 中国农业科学院郑州果树研究所
- 2017-03-20 - 2019-08-30 - C12N15/11
- 本发明公开了一种辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记及其选育方法和应用，所述的分子标记包含有变异特征正向引物CACTA‑INS‑F、反向引物CACTA‑INS‑R以及无变异特征正向引物WILD‑F、反向引物WILD‑R。首先采用上述分子标记选出含有隐性基因hd的桃品种，然后用基因型hdhd的亲本与基因型为Hdhd的亲本或基因型为HdHd的优质亲本进行杂交，直到从后代中选出基因型为hdhd的SH肉质桃品种单株，并结合田间表型和乙烯测定，可以高效定向改良及培育桃SH肉质耐贮品种，对于桃果实耐贮运新品种的选育具有重要的现实意义。
- 专利分类
- CYP3A基因的多态性检测用探针、多态性检测方法、药效评价方法以及多态性检测用试剂盒
- 多态性检测用探针、多态性检测方法、药效判定方法以及多态性检测用试剂盒
- 多态性检测用探针、多态性检测方法、药效判定方法以及多态性检测用试剂盒
- 慢性牙周炎相关单核苷酸多态性检测用探针和引物、及其试剂盒
- 一种开发烟草中具多态性SSR分子标记的方法
- 一种用于检测UGT1A1基因多态性的引物、探针、试剂盒及检测方法
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- 一种焦磷酸测序法检测肠促胰素作用相关的单核苷酸多态性的试剂盒及方法
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- 伊立替康的治疗效果预测方法及应用该方法的试剂盒
