[发明专利]通过S-标签-S-蛋白融合物的来自植物的寡聚体疫苗在审
| 申请号： | 201780085836.8 | 申请日： | 2017-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN110300805A | 公开（公告）日： | 2019-10-01 |
| 发明（设计）人： | H·法恩;U·康拉德;T·T·胡 | 申请（专利权）人： | 莱布尼兹植物遗传学和文化植物研究所(IPK) |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C07K19/00;C07K14/435 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人： | 傅宇昌 |
| 地址： | 德国盖特*** | 国省代码： | 德国;DE |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋白质 融合蛋白 标签融合蛋白 真核细胞 尾片段 抗原 寡聚 抗体 蛋白 疫苗 蛋白融合 寡聚体 标签 | ||
【说明书】：
本发明涉及用于通过在真核细胞中共表达两种融合蛋白来在真核细胞中产生寡聚蛋白质的方法，所述两种融合蛋白包括蛋白质‑S‑标签融合蛋白，其中所述蛋白质为抗原或抗体；和S‑蛋白‑尾片段(tp)融合蛋白。进一步地，本发明涉及至少包含蛋白质‑S‑标签融合蛋白和S‑蛋白‑尾片段(tp)融合蛋白的寡聚蛋白质，其中所述蛋白质‑S‑标签融合蛋白中的蛋白质为抗原或抗体；以及在疫苗中的用途。
本发明涉及用于通过在真核细胞中共表达两种融合蛋白来在真核细胞中产生寡聚蛋白质的方法，寡聚蛋白质，以及其在疫苗中的用途。
现有技术
甲型流感病毒(负链有包膜正黏病毒)属于最严重的呼吸系统病原体。它们引起严重的和可能致死的疾病(Cox等人,2004)。预期高度致病的禽流感病毒将会引起下一次全球大流行病威胁，这是由于容易由禽类宿主扩散以及其直接感染人类的能力(Yen和Webster,2009)。因此，开发出有效且廉价的疫苗接种策略是即将出现的需求。
处于研究的焦点中的是来自植物的亚单位疫苗。Topp等人公开了在植物中重组地产生蛋白质(Topp等人,2016)。一项最近开发出的策略是通过将血凝素基因克隆到经充分表征的载体中和瞬时表达来在烟草物种本氏烟草(N.benthamiana)中产生基于病毒样颗粒的疫苗(Landry等人,2010；D’Aoust等人,2008)。不利的是，该策略包括下游加工步骤，例如几次过滤、渗滤、连续流离心和切向流过滤，或者备选地，色谱方法。
备选地，在本氏烟草叶细胞的内质网(ER)中瞬时产生三聚血凝素，以避开限制例如高的下游成本和低的病毒样颗粒的表达水平(Phan等人,2013)。关于三聚化，将血凝素在C末端处与三聚基元GCN4-pII相融合(Harbury等人,1993)。
Czajkowsky等人公开了使用Fc融合蛋白作为疫苗(Czajkowsky等人,2012)，其中所述Fc融合物通过增加血浆半寿期、增加与Fc受体的相互作用以及增加可溶性和稳定性而增加了抗原的治疗活性。Louveiro等人描述了基于血凝素-Fc融合蛋白的流感疫苗(人H1、H3流感病毒和禽H5流感病毒)(Loureiro等人,2011)。
US 7,067,110 B1公开了用于增强蛋白质和肽抗原的免疫原性的Fc-融合蛋白，其中将所述抗原与免疫球蛋白重链恒定区(CH2、CH3、CH4)相融合。进一步地，所述疫苗包含用于增强或调节特定免疫应答的佐剂，优选地人细胞因子。抗原选自前列腺特异性膜抗原、细胞因子受体的胞外结构域、病毒蛋白质或肿瘤特异性蛋白质。
备选地，通过使用具有S-标签的抗原融合蛋白，描述了用于在疫苗中使用的抗原的纯化。US 7,311,918 B2公开了轮状病毒亚单位疫苗，其包含具有选自麦芽糖结合蛋白、多组氨酸残基、S-标签、谷胱甘肽-S-转移酶等的融合伙伴(其防止轮状病毒融合蛋白发生复合物形成并且有助于纯化)的重组轮状病毒融合蛋白。US 2013/0164296 A1公开了作为亚单位疫苗免疫原的连接有例如麦芽糖结合蛋白、S-标签或谷胱甘肽-S-转移酶的融合蛋白，其中融合蛋白伙伴可以防止病毒融合蛋白装配成多聚形式。Asai等人公开了在S-标签(源自人核糖核酸酶1的氨基末端15-氨基酸肽)(人S-标签)与S-蛋白(人核糖核酸酶1的残基21至124)之间的特异性相互作用的用途，所述用途为将酶位点特异性地缀合至抗体以便靶向药物递送以用于癌症治疗(Asai等人,2005)。
相反地，US 2013/0039942 A1公开了关于针对微生物和肿瘤的自辅佐性疫苗的组合物和方法，其中将多聚化-细胞内细胞传导盒插入到病毒或载体中。
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- 许为钢;李艳;王会伟;齐学礼;方宇辉;张磊 - 河南省农业科学院小麦研究所
- 2016-07-21 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明公开了玉米C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因在提高小麦氮素利用效率中的应用。本发明提供了C4型植物的pepc或其编码基因或表达该编码基因的重组载体在促进C3型植物对氮的吸收、促进C3型植物根系生长和提高C3型植物产量中的应用。本发明利用基因枪介导法将玉米C4型pepc基因导入普通小麦周麦19，创制出了可稳定遗传与表达，氮素吸收利用效率较受体对照显著提高的转基因小麦材料，为利用该基因改良小麦等C3作物的养分吸收利用效率，选育高产优质节本高效转基因小麦新品种提供了材料和技术支撑。
- OsSAPK7蛋白及其编码基因在提高水稻白叶枯病抗性中的应用-201610808958.2
- 周永力;张帆;卢家铃;黎志康 - 中国农业科学院作物科学研究所
- 2016-09-07 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明公开了一种OsSAPK7蛋白及其编码基因在提高水稻白叶枯病抗性中的应用。本发明提供了一种培育转基因水稻的方法，包括如下步骤：将编码OsSAPK7蛋白的基因导入出发水稻，得到对白叶枯病的抗性提高的转基因水稻；所述OsSAPK7蛋白，是由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述编码OsSAPK7蛋白的基因编码区如序列表的序列1自5’末端第1‑1080位核苷酸所示。本发明还保护所述OsSAPK7蛋白及其编码基因在提高水稻白叶枯病抗性中的应用。本发明对于培育抗白叶枯病水稻新品种具有重要的意义，适合于推广应用。
- 一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的培养基及方法-201611020414.6
- 邹雪;王西瑶;黄雪丽;余金龙;李立芹;倪甦;刘帆;余丽萍;彭洁;杨兰淅;唐晓;邸雪妮;邓孟胜 - 四川农业大学
- 2016-11-14 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明涉及一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的培养基，所述培养基包括1.0mg/L的6‑BA、0.2mg/L的TDZ、0.05mg/L的2,4‑D，以及0.1mg/L的GA3；还涉及一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的方法，包括步骤：(1)预培养；(2)农杆菌侵染和共培养；(3)筛选培养；以及(4)生根培养。本发明以取材广泛易得的马铃薯试管苗茎段为外植体，建立茎段的体胚高效再生及遗传转化的培养基，可获得90％～100％的芽分化效率，同时改进培养方式、调节农杆菌侵染浓度，提高了转化和筛选效率，经过30d左右的筛选即可获得大量转基因株系，整体所需周期大大缩短。
- 水稻CIPK2基因在调控根系生长和氮素吸收中的应用-201611209856.5
- 张志兴;李鹏辉;李忠;陈鸿飞;林文雄 - 福建农林大学
- 2016-12-24 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明提供水稻CIPK2基因在调节水稻根系生长和氮素吸收中的应用，通过对水稻CIPK2的根系特异表达植株的表型进行分析，在低氮条件下，CIPK2根系特异表达植株与野生型相比，根系明显变大，有效分蘖数增加2‑3个，正常氮条件下，二者差异不显著。根系特异表达CIPK2植株与野生型在低氮条件下表型差异明显，尚无该基因相关作用报道；通过根系特异表达CIPK2植株的表型推测根系特异表达CIPK2基因可以促进水稻根系的生长，提高水稻在低氮条件下对氮素的吸收，该基因功能的研究结果对提高作物产量，减少氮肥的使用有指导意义。
- 利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用-201510854747.8
- 夏兰琴;孙永伟;赵云德;马有志;吴传银;张欣 - 中国农业科学院作物科学研究所
- 2015-11-30 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明公开了利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用。本发明的用于植物基因组定点修饰的系统，含有用于植物基因组定点修饰的载体和供体DNA；所述用于植物基因组定点修饰的载体含有Cas9蛋白表达盒、gRNA表达盒和供体DNA；所述gRNA表达盒编码两种gRNA，所述两种gRNA分别靶向于目的植物的靶DNA的两个靶位点；所述靶DNA中待定点修饰片段位于所述两个靶位点之间。利用本发明的系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的技术体系，无脱靶效应，为在水稻和其它作物中利用此系统进行基因的定点修饰提供了依据，为改良其它重要农作物的农艺性状提供基础。
- 具有增加的除草剂耐性的植物-201780087003.5
- R·阿朋特;S·特雷施;D·马萨;M·维切尔;T·塞萨尔;J·保利克 - 巴斯夫农业公司
- 2017-12-18 - 2019-10-25 - C12N15/82
- 本发明涉及包含编码突变PPO多肽的多核苷酸的植物或植物部分，所述多核苷酸的表达赋予植物或植物部分对除草剂的耐性。
- 专利分类
