[发明专利]一种植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法在审
| 申请号： | 201910590670.6 | 申请日： | 2019-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN110257316A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 于琳;何自福;佘小漫;蓝国兵;汤亚飞;李正刚;邓铭光 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N3/00 | 分类号： | C12N3/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 单香杰 |
| 地址： | 510640 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分生孢子 炭疽病菌 分离物 分生孢子悬浮液 快速分离 单菌落 种植物 显微镜 刺盘孢菌 技术难度 继代培养 浓度测定 研究植物 植物病斑 重要意义 单孢子 高纯度 炭疽病 稀释法 一步法 孢子液 稀释 病斑 侵染 诱导 解剖 后代 防治 配置 | ||
1.一种植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.植物病斑组织炭疽病菌分生孢子的诱导；
S2.分生孢子悬浮液的配置；
S3.分生孢子悬浮液的浓度测定及稀释；
S4.分生孢子的培养；
S5.单孢子萌发形成的单菌落的标记；
S6.继代培养单菌落获得纯化的单分生孢子分离物。
2.根据权利要求1所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，步骤S1中所述分生孢子的诱导是将植物病斑组织置于铺有灭菌水湿润的滤纸的器皿中，用保鲜膜覆盖器皿表面，置于白炽灯下光照，诱导病斑组织产生分生孢子；诱导6～24h后，于光学显微镜下检测孢子产量，若在10倍物镜下一个视野内分生孢子的数量达20个，则进行下一步；否则继续进行诱导。
3.根据权利要求2所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，所述诱导时间为20h。
4.根据权利要求1所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，步骤S2中所述分生孢子悬浮液的配置是采用灭菌后的镊子夹取病斑组织上的分生孢子堆或分生孢子盘，放入装有灭菌水的灭菌离心管中，于800～1000rpm条件下震荡9～12min，即得分生孢子悬浮液。
5.根据权利要求4所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，所述震荡条件为900rpm，震荡时间为10min。
6.根据权利要求1所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，步骤S3中所述分生孢子悬浮液的浓度测定及稀释是吸取分生孢子悬浮液置于普通光学显微镜下观察，计数视野中分生孢子的数量并计算浓度；再用灭菌水将分生孢子悬浮液稀释50倍。
7.根据权利要求1所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，步骤S4中所述分生孢子的培养是将分生孢子悬浮液接种于弱酸性培养基中，于24～28℃培养18～24h。
8.根据权利要求7所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，所述培养温度为25℃，培养时间为20h。
9.根据权利要求1所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，步骤S5中所述单孢子萌发单菌落的标记是将培养器皿倒扣置于普通光学显微镜下观察，寻找单个分生孢子萌发形成芽管进而形成的单菌落，所选择的单菌落周围无其它菌落，在培养皿表面画圈标记萌发的单菌落。
10.根据权利要求1所述植物炭疽病菌分生孢子快速分离纯化方法，其特征在于，步骤S6中所述继代培养是用灭菌后的接种针挑取标记的单菌落至新鲜的PDA平板上，封口膜封口，于25℃培养后即得纯化的单分生孢子分离物。
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