[发明专利]一种柑橘黄龙病胶体金检测试纸条及其制备方法、试剂盒

权利要求书

1.一种柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：包括从加样端依次搭接在底板上的样品垫、金垫、NC膜、吸水纸，所述金垫上包被有胶体金标记的第一抗体，所述第一抗体为SDE-1的单克隆抗体、SDE-1的兔多克隆抗体或SDE-1的鼠多克隆抗体，所述NC膜的检测线上包被有第二抗体，所述第二抗体为兔多克隆抗体或鼠多克隆抗体，质控线上包被有第三抗体，所述第三抗体为羊抗兔抗体、羊抗鼠抗体或羊抗大鼠抗体。

2.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：所述第一抗体的浓度为4-20ug/ml，优选为17ug/ml，所述第三抗体为的浓度为0.2-1mg/ml。

3.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：所述第二抗体为兔多克隆抗体，所述兔多克隆抗体的浓度为0.2-1.5mg/ml。

4.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：所述第二抗体为鼠多克隆抗体，所述鼠多克隆抗体的浓度为0.5-2mg/ml。

5.权利要求1-4所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)制备胶体金；

(2)制备包被有胶体金标记的第一抗体的金垫；

(3)制备包被抗原的NC膜：将第二抗体稀释液包被于检测线上，将第三抗体稀释液包被于质控线上；

(4)将样品垫、金垫、NC膜、吸水纸依次粘附在底板上，斩切、组装后即得检测试纸条。

6.根据权利要求5所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述胶体金的制备方法包括如下步骤：

称取0.5-2.0g柠檬酸三钠加100ml超纯水，制成浓度为0.5-2.0％的柠檬酸三钠溶液；称取0.5-2.0g氯金酸和100ml超纯水，制成氯金酸溶液并在4℃下保存；称取氯金酸溶液1.0-4.0ml加入100ml超纯水用搅拌加热器加热至沸腾后，迅速加入柠檬酸三钠溶液2.0-6.0ml，继续搅拌加热3min，直至溶液由深灰色变成酒红色时取出，继续搅拌10min，冷却至室温，用超纯水定容至原体积100ml，用一次性滤膜过滤后，4℃保存备用。

7.根据权利要求5所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述金垫的制备方法包括如下步骤：

向pH值为7-9的胶体金中加入1-20μg的第一抗体，静置30min-60min后加入封闭物进行封闭，再次静置30min-60min，静置后以7000-12000的转速离心15min-60min收集沉淀，分别对获得的第一抗体的沉淀中加入复溶液对沉淀进行复溶，再将所得复溶的溶液混合，混匀后均匀铺在或喷在玻璃纤维素膜表面，真空冻干、真空抽干或烘干后，即得到包被有胶体金标记的第一抗体的金垫。

8.根据权利要求7所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述复溶液按重量百分比计包括：0.1％-2％Tris、0％-2％PVP、0.1％-0.5％Tween-20、2％-20％蔗糖、0.1％-1％BSA，余量为水，优选地，所述复溶液的添加量为100-1000μL；优选地，所述封闭物为酪蛋白或质量分数为20％的BSA，优选地，所述胶体金的pH值通过向每1ml胶体金添加2-20μL 0.2M K₂CO₃溶液调整。

9.根据权利要求5所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述NC膜的检测线上包被的第二抗体稀释液的制备方法包括如下步骤：将第二抗体用pH为7.0-8.0的碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液稀释即得到第二抗体的稀释液；所述NC膜的质控线上包被的第三抗体稀释液的制备方法包括如下步骤：将第三抗体使用pH为7.0-8.0的碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液稀释至即得到第三抗体的稀释液。

10.一种柑橘黄龙病胶体金检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-4任一所述的试纸条、刀片、加样滴管、第一溶液，所述第一溶液为PBS、PBS+0.1％～1％Triton-x100或PBS+0.1％～1％Tween20。