[发明专利]得到经过修饰降低了鼠抗体可变区之免疫原性的免疫球蛋白的方法及含有免疫球蛋白的组合物

说明书

本发明涉及免疫学领域，特别是涉及得到经过修饰降低了鼠抗体可变区之免疫原性的免疫球蛋白的方法及含有这些免疫球蛋白的组合物。

免疫系统产生以高亲和力和特异性与很大范围的抗原结合并激发效应细胞机制的抗体。医学中已将抗体用作诊断和治疗剂，并且随着新技术的出现而成功地提高了它们的应用潜力。

杂交瘤技术的应用得以分离产生单一特异性抗体的细胞系(Koehler G.，Milstein C.(1975)，Natare(London)256，495—497)，并且基因技术允许自杂交瘤构建一系列工程化抗体。

抗体的区域结构有利于对抗体进行工程化改造，并且通过得到或丢失其某些性质而进一步改善许多抗体的实用性。抗体的抗原结构特性提供了识别功能，并可将其连接到一种或多种效应剂上。然后则必须基于效力、特异性和免疫原性标准来检验抗体是否同时具有这两种性质。

已很容易从被免疫的啮齿动物得到产生单克隆抗体的杂交瘤。目前已将几种鼠单克隆抗体广泛用于恶性肿瘤的影像诊断和治疗、抗中毒性休克预防给药、修饰移植物排斥部分，以及缓解急性炎症反应。在使用啮齿动物抗体进行治疗的大多数病例中，接受者体内都引发了针对抗体的免疫反应。这些反应已限制了治疗期限和效果。

虽然存在几种选择，例如使用SCID—hu小鼠、体外免疫、重组的文库，或这些方法的某些有用结合，但因为有许多已明确鉴定的啮齿动物单克隆抗体已可以得到(如果能够排除免疫反应，即可将其用于临床)，所以开发人来源的相似制剂的努力已受到挫拆，而生产工程化改造的抗体则引起了很大关注。

已设计了工程化抗体，以尽可能地用等同的人序列取代外源序列。在基团工程化抗体中，大都是将来自不同种的免疫球蛋白的片段连接在一起的嵌合抗体。

首先，构建了包含与人恒定区融合之啮齿动物可变区的嵌合抗体。特别是小鼠/人嵌合抗体因表现出同样的特异性，但与其小鼠对应物相比又降低了免疫原性，故可用于免疫治疗。下列参考文献描述了嵌合抗体技术：Lobuglio et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：4220—4224(1989)；美国专利4,816,567；PCT国际公开WO 87/02671(1987年5月7日)；欧洲专利公开255,694(1988，2，10)；欧洲专利公开274,394(1988年7月13日)；欧洲专利公开323,806(1989年7月12日)；PCT国际专利公开WO89/00999(1989年2月9日)；欧洲专利公开327,000(1989年8月9日)；欧洲专利公开328,404(1989年8月16日)和欧洲专利公开332,424(1989年9月12日)。

值得注意的是，用人等同物取代恒定区也可能不降低它们的免疫原性，而仍有大约一半的接受者产生了对啮齿动物可变区的免疫反应。因此，已广泛地操作啮齿动物抗体，以使之更加相似于人抗体。

已实现的进一步降低嵌合抗体之免疫原性的方法是，首先只将啮齿动物单克隆抗体的CDR(互补决定区)移植到人框架区上，然后再与适当的恒定区融合(Jones et al.，Nature 321：522—525(1986))。这样完成CDR移植的方法常常产生不完善的人抗体，即是说所得到的抗体失去了亲和性，或者在保留其原有亲和性的尝试中，许多鼠框架残基已取代了相应的被选择之人框架的残基(Winter，欧洲专利申请，239,400；Riechmann，et al.，Nature332：323—327(1988))。

就鉴定用于转移的最小数目的残基，以达到对免疫原性有最小潜在影响的有用结合亲和性这一目的来说，已经发展了许多战略，但从所显示的结果看，每个战略都只在重建亲本亲和性中取得一定程度上的成功。

虽然也已发现某些邻近框架残基参予抗原结合，但主要还是根据CDR的结构和相对变位来确定抗体结合位点的配基结合特性(Davies et al.，Ann.Rev.Biochem.59：439—473(1990))。因此，如果能够严格地保留其CDR结构及某些邻近残基、它们彼此间的相互作用，以及它们与可变区的相互反应，便可以维持抗体的精确特异性。