[发明专利]抗咽喉炎特异性复合IgY及其制剂

摘要

本发明公开一种抗咽喉炎特异性复合IgY及其制备方法和制剂。本发明抗咽喉炎特异性复合IgY通过优选具高免疫应答能力的良种鸡，用全菌和菌体成份的复合抗原，分别对优选的特种鸡进行强化免疫，检取强化免疫鸡所产免疫蛋，制得抗咽喉炎复合IgY粗提物干粉成品，IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。用本发明IgY制备的抗咽喉炎口喷制剂无化学有害物质、天然安全并可直接喷服。

主权项

1、一种抗咽喉炎复合IgY粗提物，其特征在于该IgY粗提物是由如下方法制备的：优选具高免疫应答能力的良种鸡：用A簇溶血性链菌制作抗原，分别免疫母鸡，每次注射1ml抗原在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次；于第一次注射后第7个月，把这些鸡所产的蛋标记后分别提取其中的IgY，以ELISA法检测所制得的IgY的效价；再比较其效价，选出其中能制得IgY效价≥1∶128的免疫应答能力特别强的鸡只，再用这批鸡所产的蛋孵出优良鸡种，待其长大至2-3个月，作为本发明优选的高免疫应答能力的特种鸡；复合抗原的制备：选取A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、G簇溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌为咽喉炎和扁桃腺炎主要致病菌；购买市售以上五种主要致病菌菌株，用细菌培养基分别在三气培养箱中常规培养；将培养好的细菌按A簇B型溶血型链球菌占45-30％，肺炎双球菌占15-25％，G簇溶血性链球菌占10-15％，金黄色葡萄球菌占10-20％，白色葡萄球菌占20-10％的比例混合匀化；按1∶1的比例将福氏佐剂加入混合好的菌株混和体中搅拌均匀，制得乳状全菌复合抗原；将全菌复合抗原放入高速匀浆机中，高速粉碎匀化，制得全菌和菌体成份的复合抗原；分别对优选的特种鸡进行强化免疫：用所制取的复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种鸡进行免疫，每只鸡每次注射量达到1-2ml抗原，相当于30-60亿个细菌；每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次；第一次免疫注射20天后，检取鸡所产免疫蛋；抗咽喉炎复合IgY粗提物的制备：用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀；测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀；用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间；将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时；将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1～0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌；再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白；将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌；将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗咽喉炎复合IgY粗提物干粉成品。