[发明专利]一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 5的方法无效
申请号: | 200910031901.6 | 申请日: | 2009-07-02 |
公开(公告)号: | CN101619325A | 公开(公告)日: | 2010-01-06 |
发明(设计)人: | 何韶衡;魏继福 | 申请(专利权)人: | 江苏省人民医院 |
主分类号: | C12N15/866 | 分类号: | C12N15/866;C12P21/02 |
代理公司: | 南京苏科专利代理有限责任公司 | 代理人: | 何朝旭 |
地址: | 210029*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明涉及一种生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 5的方法,尤其是一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Pera5的方法,属于基因工程技术领域。本发明通过杆状病毒-昆虫表达系统生产美洲大蠊过敏原Per a 5蛋白,从而避免在不同的表达系统中(例如细菌和酵母菌)对Per a 5过敏原结构造成影响的问题,并提供一种亲和层析的方法,解决天然Per a 5过敏原纯化工艺复杂的问题。使用杆状病毒-昆虫表达系统得到的Per a 5蛋白的活性是使用大肠杆菌得到的Per a 5蛋白活性的1.6倍。 | ||
搜索关键词: | 一种 杆状病毒 昆虫 表达 系统 生产 美洲 过敏原 蛋白 per 方法 | ||
【主权项】:
1.一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 5的方法,其步骤包括:(1)从美洲大蠊组织中提取总RNA;(2)将总RNA反转录为cDNA,以cDNA为模板,用引物ATGACCATCGACTTCTACTAC和TCACTTCTTGGCGAGGTTATC进行PCR反应,获得美洲大蠊过敏原Per a 5蛋白的编码基因;(3)将Per a 5蛋白的编码基因克隆到杆状病毒载体中,转染昆虫细胞诱导表达Per a 5蛋白;(4)采用亲和层析方法对Per a 5蛋白进行纯化,从而得到美洲大蠊过敏原Per a 5蛋白。
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- 2017-04-20 - 2018-10-23 - C12N15/866
- 公开了用于在体外在昆虫细胞中产生腺相关病毒(AAV)的组合物和方法。重组杆状病毒载体包含AAV衣壳蛋白基因表达盒(Cap)、AAV Rep基因表达盒(Rep)和杆状病毒同源区(hr),所述杆状病毒同源区位于距离AAV表达盒中的起始密码子高达约4kb处。与包含Cap和Rep但没有hr的对照相比,携带包含Cap、Rep和hr的重组杆状病毒的昆虫细胞中杆状病毒和AAV的产生水平更高。此外,在用包含Cap、Rep和hr的重组杆状病毒感染的昆虫细胞中,杆状病毒和AAV产生的水平在细胞连续传代中相对稳定,而在包含含有Cap和Rep但没有hr的重组杆状病毒的昆虫细胞的连续传代中,杆状病毒和AAV产生的水平下降。
- 用于基因治疗载体的表达的杆状病毒系统-201280046259.9
- 莱昂内尔·加利贝尔;奥托-维海姆·莫腾;奥雷利安·雅各布 - 吉尼松公司
- 2012-07-27 - 2018-10-09 - C12N15/866
- 本发明涉及利用单次感染即可用于表达基因治疗载体的重组杆状病毒基因组。
- 一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及应用-201410345277.8
- 乔素梅 - 宁波欣安医疗科技有限公司
- 2014-07-21 - 2018-09-11 - C12N15/866
- 本发明公开了一种预防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制备及其应用,特点是包括以下步骤:(1)制备含有H10基因的稳定的重组杆状病毒(rBV);(2)Sf9细胞表达H10的SVP;(3)SVP的纯度和稳定性,该H10重组血凝素可用于预防禽流感H10N8的感染,免疫人或动物以产生抗体和保护作用,与针对H10N8或H10血凝素的抗体发生反应,优点是具有高效、低成本的特点,可用于预防H10N8禽流感病毒的感染,另外此重组血凝素在昆虫细胞中表达,不依赖于鸡胚,很容易进行工艺放大和规模化生产。
- 一种重组腺相关病毒的制备方法-201610035538.5
- 吴阳;徐富强;何晓斌;林坤章 - 中国科学院武汉物理与数学研究所
- 2016-01-20 - 2018-09-07 - C12N15/866
- 本发明公开了一种重组腺相关病毒(rAAV)的制备方法,包括以下步骤:(1)将目标基因构建在重组型杆状病毒上,所述重组杆状病毒其基因组整合了制备rAAV所必需的腺相关病毒的Rep基因、Cap基因以及携带有目标基因的ITR核心表达元件;(2)将步骤(1)中制得的重组杆状病毒感染宿主昆虫幼虫,使得所述宿主昆虫幼虫体内产生大量rAAV;(3)将步骤(2)中获得的宿主昆虫幼虫裂解,提取rAAV并进行纯化。本发明提供的方法,通过一种高度整合的重组杆状病毒感染昆虫幼虫,从而大量制备品质稳定的基因治疗用rAAV载体。
- 重组蛋白在粉纹夜蛾蛹中的表达-201680066504.0
- 何塞·安赫尔·马丁内斯·埃斯克里瓦诺;卡门·阿尔瓦拉多·弗拉多;埃德尔·雷伊托尔·萨维德拉;米格尔·西德费尔南德斯 - 替代基因公司
- 2016-09-19 - 2018-08-31 - C12N15/866
- 本发明包括提高重组蛋白表达效率的手段和方法,特别地优化在昆虫蛹中,特别地在粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,T.Ni)蛹中重组蛋白的工业化生产。此外,本发明还涉及包含杆状病毒的蛹本身,用杆状病毒或杆粒感染、转化、转导或转染的蛹,以及适合于执行本发明的方法的装置。
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