[发明专利]单载体双向启动的Tet-on诱导表达系统及其构建方法和应用

摘要

一种单载体双向启动的Tet-on诱导表达系统，元件的连接顺序为5-’CMV-TetR-KRAB-SV40polyA-rtTA2S-M2-EB-PminCMV-KB-TRE-Tight-PminCMV-EcoR Ⅰ-Spe Ⅰ-SV40polyA-3’，Tight-PminCMV左侧的复合元件rtTA2S-M2-EB-PminCMV-KB-TRE的连接方式为3’-rtTA2S-M2-EB-PminCMV-KB-TRE-5’-5’-Tight-PminCMV-3’，其余元件均按与该系统相同方向5’-3’顺序连接；两个酶切位点EcoR Ⅰ和Spe Ⅰ位于元件Tight-PminCMV和元件SV40polyA之间。

主权项

一种单载体双向启动的Tet‑on诱导表达系统，其特征在于：其元件的连接顺序为5‑’CMV‑TetR‑KRAB‑SV40polyA‑rtTA2S‑M2‑EB‑PminCMV‑KB‑TRE‑Tight‑PminCMV‑EcoRⅠ‑Spe Ⅰ‑SV40polyA‑3’，Tight‑PminCMV左侧的复合元件rtTA2S‑M2‑EB‑PminCMV‑KB‑TRE的连接方式为3’‑rtTA2S‑M2‑EB‑PminCMV‑KB‑TRE‑5’‑5’‑Tight‑PminCMV‑3’，其余元件均按与该系统相同方向5’‑3’顺序连接；两个酶切位点EcoR Ⅰ和SpeⅠ位于元件Tight‑PminCMV和元件SV40polyA之间，该系统序列如下：ggtaccaata gttattaata gtaatcaatt acggggtcat tagttcatag cccatatatg     60gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc    120cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgccaatagg gactttccat    180tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat    240catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat    300gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc    360gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac    420tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa    480aatcaacggg actttccaaa atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt    540aggcgtgtac ggtgggaggt ctatataagc agagctggtt tagtgaaccg tcagatcatc    600gatatggcta gattagataa aagtaaagtg attaacagcg cattagagct gcttaatgag    660gtcggaatcg aaggtttaac aacccgtaaa ctcgcccaga agctaggtgt agagcagcct    720acattgtatt ggcatgtaaa aaataagcgg gctttgctcg acgccttagc cattgagatg    780ttagataggc accatactca cttttgccct ttagaagggg aaagctggca agatttttta    840cgtaataacg ctaaaagttt tagatgtgct ttactaagtc atcgcgatgg agcaaaagta    900catttaggta cacggcctac agaaaaacag tatgaaactc tcgaaaatca attagccttt    960ttatgccaac aaggtttttc actagagaat gcattatatg cactcagcgc tgtggggcat   1020tttactttag gttgcgtatt ggaagatcaa gagcatcaag tcgctaaaga agaaagggaa   1080acacctacta ctgatagtat gccgccatta ttacgacaag ctatcgaatt atttgatcac   1140caaggtgcag agccagcctt cttattcggc cttgaattga tcatatgcgg attagaaaaa   1200caacttaaat gtgaaagtgg gtcgccaaaa aagaagagaa aggtcgacgg cggtggtgct   1260ttgtctcctc agcactctgc tgtcactcaa ggaagtatca tcaagaacaa ggagggcatg   1320gatgctaagt cactaactgc ctggtcccgg acactggtga ccttcaagga tgtatttgtg   1380gacttcacca gggaggagtg gaagctgctg gacactgctc agcagatcgt gtacagaaat   1440gtgatgctgg agaactataa gaacctggtt tccttgggtt atcagcttac taagccagat   1500gtgatcctcc ggttggagaa gggagaagag ccctggctgg tggagagaga aattcaccaa   1560gagacccatc ctgattcaga gactgcattt gaaatcaaat catcagttta agcggccgcc   1620acagcgggga gatccagaca tgataagata cattgatgag tttggacaaa ccacaactag   1680aatgcagtga aaaaaatgct ttatttgtga aatttgtgat gctattgctt tatttgtaac   1740cattataagc tgcaataaac aagttaacaa caacaattgc attcatttta tgtttcaggt   1800tcagggggag gtgtgggagg ttttttaaag caagtaaaac ctctacaaat gtggtatggc   1860tgattatgat ccggctgcct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg   1920cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt    1980cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggcgcag ccatgagtct agtttacccg    2040gggagcatgt caaggtcaaa atcgtcaaga gcgtcagcag gcagcatatc aaggtcaaag    2100tcgtcaaggg catcggctgg gagcatgtct aagtcaaaat cgtcaagggc gtcggccggc    2160ccgccgcttt cgcactttag ctgtttctcc aggccacata tgattagttc caggccgaaa    2220aggaaggcag gttcggctcc ctgccggtcg aacagctcaa ttgcttgtct cagaagtggg    2280ggcatagaat cggtggtagg tgtctctctt tcctcttttg ctacttgatg ctcctgttcc    2340tccaatacgc agcccagtgt aaagtggccc acggcggaca gagcgtacag tgcgttctcc    2400agggagaagc cttgctgaca caggaacgcg agctgatttt ccagggtttc gtactgtttc    2460tctgttgggc gggtgccgag atgcacttta gccccgtcgc gatgtgagag gagagcacag    2520cggaatgact tggcgttgtt ccgcagaaag tcttgccatg actcgccttc cagggggcag    2580aagtgggtat gatgcctgtc cagcatctcg attggcaggg catcgagcag ggcccgcttg    2640ttcttcacgt gccagtacag ggtaggctgc tcaactccca gcttttgagc gagtttcctt    2700gtcgtcaggc cttcgatacc gactccattg agtaattcca gagcgccgtt tatgactttg    2760ctcttgtcca gtctagacat gaattaattc cgcgatctga cggttcacta aacgagctct    2820gcttatatag gcctcccacc gtacacgcct agcgagctcg actttcactt ttctctatca    2880ctgataggga gtggtaaact cgactttcac ttttctctat cactgatagg gagtggtaaa    2940ctcgactttc acttttctct atcactgata gggagtggta aactcgactt tcacttttct    3000ctatcactga tagggagtgg taaactcgac tttcactttt ctctatcact gatagggagt    3060ggtaaactcg actttcactt ttctctatca ctgataggga gtggtaaact cgactttcac    3120ttttctctat cactgatagg gagtggtaaa ctcgactagg cgtgtacggt gggaggccta    3180tataagcaga gctcgtttag tgaaccgtca gatcgcgaat tcactagtac tagacacagc    3240ggggagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc    3300agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta    3360taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg    3420gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt atggctgatt    3480atgatccggc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct    3540cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg    3600cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg agagatct                 3648。