[发明专利]微生物能力验证沙门氏菌样品的制备方法

摘要

本发明涉及微生物能力验证技术领域，公开了一种微生物能力验证沙门氏菌样品的制备方法，以沙门氏菌为目标菌，以粘质沙雷氏菌、弗氏柠檬酸杆菌、大肠杆菌为干扰菌，包括：(A)、菌株的复苏、增菌；(B)、菌株的分离；(C)、菌悬液的制备；(D)、冷冻干燥和包装。最后制备的样品包括：简单级阴性样品，简单级阳性样品；中级阴性样品，中级阳性样品；困难级阴性样品，困难级阳性样品。同一等级的样品配对使用。本发明方法制备的样品稳定性好，菌种存活率高，且具有合理的不同难度等级标准。

主权项

1.微生物能力验证沙门氏菌样品的制备方法，以沙门氏菌为目标菌，以粘质沙雷氏菌、弗氏柠檬酸杆菌、大肠杆菌为干扰菌，其特征在于包括如下步骤：(A)、菌株的复苏、增菌：将目标菌的标准菌和各干扰菌的标准菌分别加入到营养肉汤或营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使所述各标准菌复苏、生长和增菌，培养期间并对各菌株进行菌种鉴定；其中各菌株的培养基中添加有海藻糖，所述海藻糖在培养基中的含量为2‑4g/mL；(B)、菌株的分离：当上述培养的沙门氏菌培养至稳定期时对其培养基进行离心分离，得到沙门氏菌菌泥；当每一种干扰菌培养至对数生长期后，对其培养基进行离心分离，得到各干扰菌菌泥，其中对培养有菌株的各个培养基进行分离前，将所述培养基放置于45‑50℃的环境中1‑2h；(C)、菌悬液的制备：简单级阴性样品菌悬液的制备：将1份大肠杆菌菌泥添加到浓度为8‑12wt％的脱脂牛乳水溶液中，控制菌悬液的浓度为(3‑7)×104cfu/mL，搅拌均匀后得到简单级阴性样品菌悬液；简单级阳性样品菌悬液的制备：将1份沙门氏菌菌泥和1份大肠杆菌菌泥添加到浓度为8‑12wt％的脱脂牛乳水溶液中，控制菌悬液中目标菌的浓度为(3‑7)×102cfu/mL，干扰菌的浓度为(3‑7)×104cfu/mL，搅拌均匀后得到简单级阳性样品菌悬液；中级阴性样品菌悬液的制备：将1份大肠杆菌菌泥和1份弗氏柠檬酸杆菌菌泥添加到浓度为8‑12wt％的脱脂牛乳水溶液中，各干扰菌的浓度为(3‑7)×104cfu/mL，搅拌均匀后得到中级阴性样品菌悬液；中级阳性样品菌悬液的制备：将1份沙门氏菌菌泥、1份大肠杆菌菌泥和1份弗氏柠檬酸杆菌菌泥添加到浓度为8‑12wt％的脱脂牛乳水溶液中，控制菌悬液中目标菌的浓度为(3‑7)×102cfu/mL，各干扰菌的浓度为(3‑7)×104cfu/mL，搅拌均匀后得到中级阳性样品菌悬液；困难级阴性样品菌悬液的制备：将1份大肠杆菌菌泥、1份粘质沙雷氏菌菌泥和1份弗氏柠檬酸杆菌菌泥添加到浓度为8‑12wt％的脱脂牛乳水溶液中，各干扰菌的浓度为(3‑7)×104cfu/mL，搅拌均匀后得到困难级阴性样品菌悬液；困难级阳性样品菌悬液的制备：将1份沙门氏菌菌泥、1份大肠杆菌菌泥、1份粘质沙雷氏菌菌泥和1份弗氏柠檬酸杆菌菌泥添加到浓度为8‑12wt％的脱脂牛乳水溶液中，控制菌悬液中目标菌的浓度为(3‑7)×102cfu/mL，各干扰菌的浓度为(3‑7)×104cfu/mL，搅拌均匀后得到困难级阳性样品菌悬液；在配制各菌悬液时，所述脱脂牛乳水溶液中还添加有壳聚糖和聚乙烯醇中的一种或两种；所述壳聚糖或聚乙烯醇在所述脱脂牛乳水溶液中的浓度均为0.2‑0.5wt％；上述份数均为重量份数；(D)、冷冻干燥和包装：分别称取上述制备的每种菌悬液1mL，并分别添加到各自的安瓶中，将所述安瓶平开盖放入冷冻干燥机中，在‑22℃至‑18℃温度下预先冻结7‑9h，接着转移到温度为‑50℃至‑40℃的冷冻干燥机中，抽真空并使真空度达到100μmHg以上，然后将安瓶均匀放置于冷冻室内的隔板上，升华干燥45‑55h；待安瓶内物质呈乳白色疏松海绵状时，对安瓶继续进行解析干燥1.5‑2.5h；结束后对安瓶进行封口、压盖、贴签，制得微生物能力验证沙门氏菌样品，将所述样品贮存于4℃的环境中。