[发明专利]羰基还原酶基因、编码酶、载体、菌株及应用有效
| 申请号： | 201510383476.2 | 申请日： | 2015-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN105039361B | 公开（公告）日： | 2019-08-30 |
| 发明（设计）人： | 柳志强;郑裕国;陈翔;林超平;王亚军;吴林;姚丹凯;余道褔;胡忠梁;董思川;沈寅初 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N9/04;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/02;C12P7/62;C12P13/00;C12P17/14;C12N1/16;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京志霖恒远知识产权代理事务所(普通合伙) 11435 | 代理人： | 成丹 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种来源于圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)ZJB14212的羰基还原酶、基因、载体、菌株，以及其在制备手性药物中间体中的应用；所述羰基还原酶能够生物催化制备高光学纯度的(S)‑N,N‑双甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙酰胺、(S)‑N‑甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙酰胺、(R)‑3‑氯‑1‑(2‑噻吩基)‑1‑丙醇、(S)‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙酸乙酯、(S)‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩基)丙腈、6‑氯‑(3R,5S)‑二羟基己酸叔丁酯、(4S)‑3‑[(5S)‑5‑(4‑氟苯基)‑5‑羟基戊酰基]‑4‑苯基‑1,3‑氧氮杂环戊烷‑2‑酮及[S‑(E)]‑2‑[3‑[3‑[2‑(7‑氯‑2‑喹啉基)乙烯基]苯基]‑3‑羟基丙基]苯甲酸甲酯。 | ||
| 搜索关键词： | 噻吩基 羟基 羰基还原酶 丙酰胺 苯基 菌株 圆红冬孢酵母 苯甲酸甲酯 二羟基己酸 高光学纯度 药物中间体 丙醇 丙酸乙酯 生物催化 制备手性 羟基丙基 羟基戊酰 基因 编码酶 氟苯基 叔丁酯 双甲基 乙烯基 喹啉基 丙腈 戊烷 氧氮 杂环 制备 应用 | ||
【主权项】：
1.一种重组羰基还原酶在制备手性药物中间体中的应用，其特征在于，所述应用为：以含羰基还原酶基因的重组工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，于pH值为6～10的缓冲液中，加入底物，辅助底物和NAD(P)+，在20～40℃、50～250rpm条件下反应，反应完全后，获得含药物手性中间体的混合液，将混合液分离纯化，获得手性药物中间体；所述底物为N,N‑双甲基‑3‑酮‑3‑(2‑噻吩基)丙酰胺盐酸盐、N‑甲基‑3‑酮‑3‑(2‑噻吩基)丙酰胺盐酸盐、3‑氯丙酰基‑2‑噻吩、3‑酮‑3‑(2‑噻吩基)丙酸乙酯、3‑酮‑3‑(2‑噻吩基)丙腈、(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯、(4S)‑3‑[5‑(4‑氟苯基)‑1,5‑二氧代戊基]‑4‑苯基‑2‑恶唑烷酮和[(E)]‑2‑[3‑[3‑[2‑(7‑氯‑2‑喹啉基)乙烯基]苯基]‑3‑羰基丙基]苯甲酸甲酯中的一种；所述辅助底物为葡萄糖、甲酸铵、异丙醇或无水乙醇中的任一种，其中：当所述辅助底物为葡萄糖时，添加葡萄糖脱氢酶构成辅助底物体系，当所述辅助底物为甲酸铵时，添加甲酸铵脱氢酶构成辅助底物体系；所述催化剂的用量以湿菌体的重量计为20～200g/L缓冲液，所述底物的初始浓度为50～2000mmol/L缓冲液，所述辅助底物的用量为25～18000mmol/L缓冲液，所述葡萄糖脱氢酶或甲酸铵脱氢酶的用量以含葡萄糖脱氢酶基因或甲酸铵脱氢酶基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体重量计均为10～200g/L缓冲液，所述NAD(P)+的用量为0～3mmol/缓冲液；所述羰基还原酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。
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- 本发明涉及为微生物发酵领域，特别涉及基因、表达载体、宿主细胞及其应用，高产玉米黄质的重组菌株的构建方法。本发明公开了一种生产玉米黄质的重组酿酒酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)，其命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SyBE_Sc0123Z020，简称SyBE_Sc0123Z020及其构建方法。本发明的重组酿酒酵母菌株相对于现有技术更为环保、成本低廉，为玉米黄质的生产提供了一种可行的方法。
- 海带钒离子依赖型卤素过氧化物酶基因及其编码蛋白-201610565700.4
- 刘涛 - 中国海洋大学
- 2016-07-18 - 2019-08-02 - C12N15/53
- 本发明涉及基因工程技术领域，具体是一种海带钒离子依赖型卤素过氧化物酶基因，该基因核苷酸序列及编码蛋白质的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：1‑37和SEQ ID NO：38‑74。本发明通过转录组测序技术结合序列分析技术获得基因序列，构建原核表达载体，通过对重组蛋白进行酶活性检测，证实了其具有非常高的碘代过氧化物酶活性，无溴代过氧化物酶和氯代过氧化物酶活性。该基因对于提高海带等藻类中的碘含量具有重要的应用价值。
- 编码生物膜形成抑制蛋白质的基因和使用具有失活基因的细菌菌株生产L-赖氨酸的方法-201410543331.X
- 河云焕;金容材;李政训;申喜星;文准玉;金亨俊;李光镐 - CJ第一制糖株式会社
- 2014-10-15 - 2019-08-02 - C12N15/53
- 本发明涉及源自棒杆菌细菌的新的分离的基因(多核苷酸)，其编码具有生物膜形成抑制活性的蛋白质；其中多核苷酸失活的产L‑赖氨酸的菌株；和使用其生产L‑赖氨酸的方法。
- 植物亚麻酸合成酶基因CsFAD2-2及其应用-201910202885.6
- 李海燕;王法微;崔景焱;李晓薇;刘伟灿;王南 - 吉林农业大学
- 2019-03-18 - 2019-07-30 - C12N15/53
- 本发明公开了植物亚麻酸合成酶基因CsFAD2‑2，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；一种表达载体，它插入了序列表SEQ NO.1所示的基因；所述的植物亚麻酸合成酶基因CsFAD2‑2提高植物物亚麻酸的含量的应用；以亚麻芥cDNA为模板，利用反转录PCR技术克隆CsFAD2‑2基因；该基因可以能够将植物体内的油酸及亚油酸催化生成亚麻酸，其过表达的转基因植株中亚麻酸含量较野生型植株高1.56倍；为基因工程育种以提高作物亚麻酸含量提供优质的候选基因。
- 专利分类
