[发明专利]一种β-甘露糖苷酶含量低的α-半乳糖苷酶的制备方法有效
| 申请号： | 201610640384.2 | 申请日： | 2016-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN106282142B | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 勇强;杨磊;陶昱恒;赖晨欢;李鑫;周梦怡;徐勇;欧阳嘉;余世袁 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12N9/40 | 分类号： | C12N9/40;C12R1/885 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种β‑甘露糖苷酶含量低的α‑半乳糖苷酶的制备方法，以里氏木霉为产酶菌株，以半乳甘露低聚糖为碳源，采用发酵法生产β‑甘露糖苷酶的酶活力不高于0.05U/mL的α‑半乳糖苷酶酶液。本发明采用里氏木霉以半乳甘露低聚糖为碳源和诱导物发酵产α‑半乳糖苷酶，在获得较高α‑半乳糖苷酶酶活力的同时，酶液中β‑甘露糖苷酶含量（活力）很低，该酶液无需纯化除去β‑甘露糖苷酶即可直接与β‑甘露聚糖酶协同水解半乳甘露聚糖制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖，可有效降低半乳甘露聚糖定向降解制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | 半乳糖苷酶 甘露糖苷酶 半乳甘露聚糖 甘露低聚糖 酶液 制备小分子 里氏木霉 酶活力 制备 发酵法生产 甘露聚糖酶 产酶菌株 诱导物 降解 水解 生产成本 发酵 协同 | ||
【主权项】：
1.一种β‑甘露糖苷酶含量低的α‑半乳糖苷酶的制备方法，其特征在于，以里氏木霉为产酶菌株，以半乳甘露低聚糖为碳源，采用发酵法生产β‑甘露糖苷酶的酶活力不高于0.05U/mL的α‑半乳糖苷酶酶液；其中，所述的半乳甘露低聚糖是由田菁种子中的半乳甘露聚糖经β‑甘露聚糖酶不完全降解得到的平均分子量为910Da的半乳甘露低聚糖。
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- 段文娟;杨禄良;谢宁;王海燕;李卓夫 - 北京挑战农业科技有限公司
- 2011-03-02 - 2011-09-14 - C12N9/40
- 本发明公开了一种α-半乳糖苷酶及其编码基因和应用。本发明提供的α-半乳糖苷酶是如下(a)或(b)或(c)：(a)由序列表中序列1自N末端第20至739位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有α-半乳糖苷酶活性的由序列1衍生的蛋白质。本发明为今后的高效表达生物反应器的建立提供技术参数，使其应用于不同的工业生产领域，本发明丰富了蛋白来源，该蛋白与已报道的蛋白氨基酸序列一致性低，为α-半乳糖苷酶的分类学提供了新的素材。
- 一种低温α-半乳糖苷酶GalA17及其基因和应用-201010238534.X
- 姚斌;石鹏君;周峻沛;袁铁铮;柏映国;黄火清;罗会颖;杨培龙;孟昆;王亚茹;赵珩 - 中国农业科学院饲料研究所
- 2010-07-23 - 2010-11-24 - C12N9/40
- 本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种低温α-半乳糖苷酶GalA17及其基因和应用。本发明提供了一种来源于天牛胃肠道共生细菌Flavobacterium sp.TN17的α-半乳糖苷酶GalA17，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，且本发明提供了编码上述α-半乳糖苷酶的编码基因galA17。本发明的α-半乳糖苷酶具有以下性质：最适pH5.5，最适温度45℃，在30-50℃间具有＞55％的酶活；良好的pH稳定性；良好的蛋白酶抗性和较好的水解各种底物的能力；可作为一种饲料或食品添加剂应用于饲料与食品行业。
- 一种α-半乳糖苷酶的制备方法及其专用菌株-201010195752.X
- 曹云鹤;董冰;王春林;张波;王晓秋;林刚;李德发 - 中国农业大学
- 2010-06-01 - 2010-10-20 - C12N9/40
- 本发明公开了一种α-半乳糖苷酶的制备方法及其专用菌株。本发明提供一种制备α-半乳糖苷酶的方法，为发酵巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33/agl-wt CGMCCNO.3813，得到α-半乳糖苷酶。所述发酵的方法为：1)将巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)X-33/agl-wt CGMCC NO.3813接种到发酵培养基中30℃培养培养23h；2)向步骤1)的发酵体系中流加甘油继续培养4h；3)向步骤2)的发酵体系中流加甲醇，进行诱导培养120h，得到α-半乳糖苷酶。本发明将巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)X-33/agl-wt CGMCC NO.3813，经过10升发酵罐发酵的发酵物能够有效降解蜜二糖、棉子糖和水苏糖，适合用于动物饲料添加剂使用。
- 一种α-半乳糖苷酶及其表达、纯化方法-201010189985.9
- 宫锋;王玲燕;高红伟;鲍国强;金泗虎;李素波;季守平;檀英霞;虞立霞;王颖丽 - 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所
- 2010-05-25 - 2010-09-29 - C12N9/40
- 本发明公开了一种α-半乳糖苷酶及其表达、纯化方法。该α-半乳糖苷酶由序列表中的SEQ ID NO：1表示，由脆弱类杆菌(Bacteriodes fragilis)ATCC25285的重组基因组DNA序列SEQ ID NO：3编码得到，为具有将人红细胞血型由B型转变为O型、由AB型转变为A型作用的蛋白质。本发明的α-半乳糖苷酶用途广泛，表达及纯化方法简便、成本低廉，具有重要的临床及科学研究意义，市场前景广阔。
- 一种具半乳甘露聚糖降解能力的嗜酸α-半乳糖苷酶AgalB及其基因和应用-201010100294.7
- 姚斌;罗会颖;王慧;王亚茹;柏映国;黄火清;石鹏君;袁铁铮;杨培龙;孟昆 - 中国农业科学院饲料研究所
- 2010-01-22 - 2010-09-01 - C12N9/40
- 本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种具半乳甘露聚糖降解能力的嗜酸α-半乳糖苷酶AgalB及其基因和应用。根据本发明的α-半乳糖苷酶AgalB，其具有如SEQ ID NO.1或3所示的氨基酸序列，编码上述α-半乳糖苷酶有如SEQ IDNO.4或6所示的核苷酸序列。本发明提供了一个新的α-半乳糖苷酶基因，其编码的α-半乳糖苷酶具嗜酸性，作用pH范围广，较好的耐热性，较强的蛋白酶抗性和较好的水解各种底物的能力，可应用于饲料、食品、医药等工业。根据本发明的技术方案就可以实现利用基因工程手段生产具半乳甘露聚糖降解能力的嗜酸α-半乳糖苷酶。
- 专利分类
