[发明专利]一种重组抗TNF-α全人源单克隆抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201711144785.X | 申请日： | 2017-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN108164601A | 公开（公告）日： | 2018-06-15 |
| 发明（设计）人： | 王强 | 申请（专利权）人： | 安徽未名生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/24 | 分类号： | C07K16/24;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 合肥市长远专利代理事务所(普通合伙) 34119 | 代理人： | 杨霞;翟攀攀 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市巢湖经济*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：合成重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的核酸序列；利用所得重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的核酸序列构建载体，转染宿主细胞，筛选高表达的细胞克隆，建立细胞库；利用所得细胞株进行培养，分离纯化，获得重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体。本发明根据中国仓鼠偏爱密码子设计合成重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的轻链、重链，构建真核表达载体，转染宿主细胞CHO‑GS‑，并采用无血清培养技术培养，分离纯化，获得高纯度的重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体。本发明制备方法操作简单，生产周期短，适于工业化生产。 1 | ||
| 搜索关键词： | 单克隆抗体 制备 转染宿主细胞 分离纯化 核酸序列 构建 真核表达载体 生产周期 仓鼠 偏爱密码子 无血清培养 技术培养 设计合成 细胞克隆 高表达 高纯度 细胞库 细胞株 轻链 重链 合成 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)合成重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的核酸序列；重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体具有轻链和重链，其中轻链的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；重链的可变区的核酸序列如SEQ ID NO.2所示，重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
b)利用步骤a)所得重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的核酸序列构建载体pHL101‑GS/Neo，转染宿主细胞，筛选高表达的细胞克隆，建立细胞库；
c)利用步骤b)所得细胞株进行培养，分离纯化，获得重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤a)中，采用中国仓鼠卵巢细胞的偏爱密码子合成重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的核酸序列。3.根据权利要求1所述重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤b)中，所述构建载体过程中，包括构建表达重链的载体、构建表达轻链的载体、构建双真核启动子驱动表达重链和轻链的载体。4.根据权利要求3所述重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤b)中，构建表达重链的载体的过程中，采用双BbsⅠ结构的酶切位点进行酶切连接。5.根据权利要求1所述重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤b)中，宿主细胞为GS缺陷型细胞CHO‑GS‑。6.根据权利要求1所述重组抗TNF‑α全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤c)中，采用无血清、分批补料培养的方式培养宿主细胞。
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