[发明专利]一种测定壳寡糖中壳二糖、壳三糖含量的方法有效
| 申请号： | 201810284389.5 | 申请日： | 2018-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN108548875B | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 李博;狄斌;杜诗琦;李玉寒;陈伯玮 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 南京艾普利德知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32297 | 代理人： | 张铂 |
| 地址： | 211198 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种测定壳寡糖中壳二糖、壳三糖含量的方法。利用9‑芴甲氧羰酰氯(Fmoc‑Cl)与壳二糖和壳三糖中的氨基反应结合，增强糖类的紫外响应。借助高效液相色谱分离衍生化产物，并用紫外检测器于250‑280nm波长下检测，通过外标法计算壳二糖和壳三糖的含量。本方法具有操作简单、检测灵敏的特点，适用于壳寡糖中微量壳二糖和壳三糖含量的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 壳二糖 壳三糖 壳寡糖 高效液相色谱分离 糖类 衍生化产物 紫外检测器 氨基反应 检测灵敏 紫外响应 外标法 波长 检测 酰氯 并用 | ||
【主权项】：
1.一种测定壳寡糖中壳二糖、壳三糖含量的方法，其特征在于通过9‑芴甲氧羰酰氯与壳寡糖结构中的伯氨基发生衍生化反应，在壳寡糖结构中引入9‑芴甲氧羰基，再使用高效液相色谱对衍生化后的壳寡糖进行分离，直接经过紫外检测器检测壳寡糖中的壳二糖、壳三糖的含量；所述衍生化反应的操作步骤是：将壳寡糖溶液和硼酸缓冲液等体积混匀，加入9‑芴甲氧羰酰氯溶液，混匀，静置3‑10分钟，再加终止液终止反应，所述9‑芴甲氧羰酰氯与壳寡糖的摩尔比为2:1—12:1；所述高效液相色谱使用碳十八烷基键合硅胶柱进行分离，紫外检测波长为250‑280nm，以含 0.1%三乙胺，pH 为4‑6的5‑20mM 醋酸铵为流动相 A，乙腈为流动相B，利用梯度洗脱程序分离衍生化产物。
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