[发明专利]三元穿梭载体及利用其构建CYVCV侵染性克隆的方法在审
| 申请号： | 201810368251.3 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108588113A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 宋震;崔甜甜;宾羽;晏建红;李中安;周常勇 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 邹晓艳 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种三元穿梭载体pTY，其序列如SEQ ID NO:11所示。还公开了一种利用pTY构建柑桔黄化脉明病毒(CYVCV)侵染性克隆的方法，包括如下步骤：(1)制备CYVCV全长cDNA；(2)采用限制性内切酶Stu I、Sma I酶切如SEQ ID NO:11所示三元穿梭载体pTY，得到pTY线性化的载体；(3)酵母转化伴随的同源重组：采用醋酸锂法将线性化载体pTY与CYVCV全长cDNA共转化酵母菌YPH501；(4)侵染性克隆鉴定：同源重组质粒转化农杆菌C58C1，筛选获得CYVCV侵染性克隆。本发明有效克服了病毒全长cDNA片段在大肠杆菌中产生毒性或不稳定导致克隆失败的现象。 | ||
| 搜索关键词： | 侵染性克隆 穿梭载体 全长cDNA 同源重组 构建 酵母菌 限制性内切酶 大肠杆菌 病毒 线性化载体 醋酸锂法 酵母转化 质粒转化 伴随的 共转化 农杆菌 线性化 柑桔 黄化 酶切 制备 克隆 筛选 失败 | ||
【主权项】：
1.一种三元穿梭载体pTY，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。
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