[发明专利]一种大肠菌群的检测方法在审
| 申请号： | 201810648840.7 | 申请日： | 2018-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN108753906A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 戈吴超 | 申请（专利权）人： | 上海紫燕食品有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/10 | 分类号： | C12Q1/10 |
| 代理公司： | 北京维正专利代理有限公司 11508 | 代理人： | 谢绪宁;薛赟 |
| 地址： | 201108 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及到一种大肠菌群的检测方法，包括如下步骤：S1、取25g样品，剪碎；S2、将样品均质处理；S3、将S2中的悬浮液在离心机中以1000‑1500r/s的速度离心4min；S4、去除表层油状液体；S5、均质剩余物质，加入助滤剂，滤过28～32μm的一级滤膜；S6、取滤后液过0.2~0.45μm的二级滤膜；S7、洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上；S8、收集大肠菌体进行检测。通过将样品均质并将悬浮液低速离心，使得油性物质上浮于表面，吸取表层油状液体并弃之，防止油状物质对后续实验产生影响；加入助滤剂，能够促进过滤、去除色素；通过一级过滤，去除大颗粒渣粒，通过二级过滤，去除干扰物去除小分子干扰物质，达到菌体分离富集，随后收集菌体。 | ||
| 搜索关键词： | 去除 二级滤膜 大肠菌群 大肠菌体 表层油 悬浮液 助滤剂 均质 检测 低速离心 二级过滤 干扰物质 均质处理 菌体分离 剩余物质 实验产生 收集菌体 一级过滤 一级滤膜 油性物质 离心机 大颗粒 干扰物 小分子 油状物 色素 富集 后液 剪碎 滤过 上浮 渣粒 洗涤 过滤 截留 | ||
【主权项】：
1.一种大肠菌群的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、在无菌台内取25g样品，剪碎；S2、将样品在5‑10倍无菌盐水中进行均质处理，得到悬浮液；S3、将S2中的悬浮液在离心机中以1000‑1500r/s的速度离心4min；S4、轻轻吸取表层油状液体，并弃之；S5、均质S4中的剩余物质，加入助滤剂，并将其以真空过滤法滤过28～32μm的一级滤膜；S6、取S5中的滤后液过0.2~0.45μm的二级滤膜；S7、用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上；S8、收集二级滤膜上的大肠菌体，进行大肠菌群检测。
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- 一种结晶紫沙门菌培养基及其生产工艺-201610888013.6
- 张永超 - 宁波市纯韩花漫生物科技有限公司
- 2016-10-10 - 2018-04-17 - C12Q1/10
- 本发明公开了一种结晶紫沙门菌培养基及其生产工艺，包括如下重量份的原料配制而成蛋白胨5‑15；乳糖5‑15；L‑半胱氨酸0.1‑1；牛肉粉1‑9；氯化钠1‑9；柠檬酸钠1‑9；胆盐5‑15；硫代硫酸钠1‑9；结晶紫0.001‑0.01；柠檬酸铁铵0.5‑1.5；溴麝香草酚蓝0.050‑0.070；琼脂11‑18。本发明操作简便，能减少检测中所需培养基种类，使检测时间从常规方法的4～7d缩短至2d，且具有检测灵敏度高的特点。
- 用于检测大肠杆菌O157：H7的显色培养基-201610661028.9
- 黄增才 - 黄增才
- 2016-08-13 - 2018-02-23 - C12Q1/10
- 本发明公布了一种用于检测大肠杆菌O157H7的显色培养基，培养基含有琼脂、蛋白胨、酵母提取物、氯化钠，还含有山梨醇、肌醇、中性红、β‑半乳糖苷酶显色底物Ⅰ5‑ 溴‑4‑氯‑3‑ 吲哚‑β‑半乳糖、β‑ 半乳糖苷酶显色底物Ⅱ邻硝基苯‑β‑D‑半乳糖苷、异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷、牛胆盐、亚碲酸钾、头孢克肟。本发明的显色培养基用于检测大肠杆菌O157H7，检测灵敏度高，特异性好，直接根据菌落颜色就可对菌株作出鉴别，目标菌落大肠杆菌O157H7颜色不同于现有技术，为科研人员提供了更多选择。
- 一种基于生化初筛及荧光纳米生物探针检测沙门菌的方法-201510318870.8
- 唐锋 - 唐锋
- 2015-06-11 - 2018-02-06 - C12Q1/10
- 本发明一种基于生化初筛及荧光纳米生物探针检测沙门菌的方法，用含培养基的拭子采样并培养，通过观测其是否产生硫化亚铁形成的黑斑而筛选出硫化氢反应阳性的拭子，然后将其与特异性抗体偶联的量子点纳米探针溶液孵育，实现探针对靶向菌的特异性结合。通过观测拭子上的量子点偶合物荧光信号达到检测靶向菌的目的。本发明配合设计的带截止滤光片及荧光激发光源的体视镜制成的人工荧光观测仪或激光共聚焦显微镜，实现可视化判断结果，可操作性强，适合广泛应用于大批量样品的实际检测工作。本发明的操作简单、特异性强、准确度高、效率高，可以在一天内完成初筛，两天完成靶向菌的分离。所需的拭子、培养基、生物探针均易于制备，适合产业化生产。
- 一种利用磁性纳米探针肉眼直接计数大肠杆菌的方法-201710854411.0
- 周昕;许海旭 - 扬州大学
- 2017-09-20 - 2018-01-23 - C12Q1/10
- 本发明公开了一种利用暗场显微镜肉眼直接观察大肠杆菌的方法，该方法是将大肠杆菌抗体和包被有蛋白A的磁珠进行偶联，构建具有特异性捕获大肠杆菌的磁探针；用该探针捕获待测样品中的大肠杆菌，在暗场显微镜下观察结果。本发明构建了结合大肠杆菌的磁探针，建立了大肠杆菌快速检测体系。基于磁探针的暗场显微镜肉眼观察方法具有简便、快速，无需特殊设备等特点，可用于实地现场鉴定样品中是否含有大肠杆菌。
- 一种沙门氏菌H抗原的位相变异试验方法-201610618448.9
- 韩涛;郑小严;戴明;高宇;柯振华;张芳 - 福建省产品质量检验研究院
- 2016-08-01 - 2017-11-10 - C12Q1/10
- 本发明公开了一种沙门氏菌H抗原的位相变异试验方法,它对待检的沙门氏菌菌株进行O抗原的血清凝集反应，根据O抗原的分群情况依次检查第1相和第2相H因子，当只检出一个相且待检菌株不是单相菌时，确定为目标菌株，之后将已知相H因子血清和目标菌株添加至无菌营养肉汤中，培养后离心收集菌体沉淀，洗菌后得到菌悬液用于待检相H抗原的玻片凝集检查。本方法位相变异后H抗原的玻片凝集速度快、现象明显、干扰小，重复性好、成功率高、操作简便，具有较高的可行性和实用性。
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