[发明专利]一种基于长片段测序检测HIV耐药位点突变序列多样性的方法在审
| 申请号： | 201810767900.7 | 申请日： | 2018-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN110714095A | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 王树伟;赵仕兰;肖云平 | 申请（专利权）人： | 上海欧易生物医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201110 上海市闵行*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于长片段测序检测HIV耐药位点突变序列多样性的方法，涉及核酸检测领域，方法包括HIV病毒RNA抽提，利用随机引物进行反转录形成cDNA，以cDNA为模板，根据HIV的耐药位点序列所设计的引物进行第一轮PCR扩增目的片段；以第一轮PCR产物为模板，用第二轮扩增引物进行第二轮扩增得到第二轮扩增产物；以第二轮的扩增产物为模板进行第三轮扩增获得扩增产物；对第三轮扩增产物进行纯化定量，等摩尔量混合后进行三代测序文库构建并上机测序；对所得数据进行分析得到每个样本中所包含的序列信息。本发明可以高通量长读长完成多样本中混合的多分子的序列检测，提高了HIV的耐药位点的检测效果、效率及准确性。 | ||
| 搜索关键词： | 扩增产物 扩增 样本 核酸检测领域 序列多样性 测序检测 测序文库 等摩尔量 扩增引物 目的片段 随机引物 位点突变 位点序列 序列检测 序列信息 长片段 反转录 高通量 测序 构建 上机 位点 引物 检测 分析 | ||
【主权项】：
1.一种基于长片段测序检测HIV耐药位点突变序列多样性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)根据HIV耐药位点序列设计第一轮扩增引物，在第一轮引物加一段通用碱基序列作为第二轮扩增引物，第三轮扩增引物包括第二轮引物的通用碱基序列的一部分、若干个碱基的样本标记序列及若干个保护碱基，并合成三轮扩增引物；/n(2)抽提HIV病毒的RNA，并用随机引物进行反转录形成cDNA；/n(3)用步骤(1)合成的第一轮扩增引物，对步骤(2)形成的cDNA进行HIV耐药位点的扩增，产生第一轮扩增产物；/n(4)用步骤(1)合成的第二轮扩增引物，对步骤(3)所产生的PCR产物进行第二轮扩增，获得第二轮PCR产物；/n(5)用步骤(1)合成的第三轮扩增引物，对步骤(4)所产生的PCR产物进行第三轮扩增，获得第三轮PCR产物；/n(6)对步骤(5)所获得的PCR产物进行纯化定量，并等摩尔量混合；/n(7)对步骤(6)所得混合产物进行长片段文库构建；/n(8)对步骤(7)所产生的文库利用PacBio机器测序，产生数据；/n(9)对步骤(8)所产生的数据进行数据分析，得到目的信息。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海欧易生物医学科技有限公司，未经上海欧易生物医学科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810767900.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 12种脑炎病毒核酸多重PCR检测试剂盒及其应用-201510886216.7
- 刘文干;金鑫;朱坤;管海华 - 南京美宁康诚生物科技有限公司;北京美康基因科学股份有限公司
- 2015-12-04 - 2020-02-14 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种12种脑炎病毒核酸多重PCR检测试剂盒及其应用，包括有用于扩增如下12种脑炎病毒特异基因位点的引物：JeV，HTLV1，WNV，HSV1，HSVII，HHV6，JCV，HTLV2，BBF，HCMV，EBV及VZV。本发明具有以下优点：本发明所述的试剂盒能够多重检测、灵敏度高且使用快捷方便。此外，本发明采用特异性的引物序列，保证检测结果的可靠性；该检测方法操作简单，省时省力；检测通量大，试剂耗材成本低；可直接对脑炎病原体样本提取的核酸进行检测；对检测平台和人工技术水平要求低，能够在常规检测中广泛推广。
- 检测禽流感病毒亚型的荧光定量PCR引物、探针和试剂盒及检测方法-201610850592.5
- 周继勇;闫丽萍;刘俊丽;雷静;粟硕;胡伯里 - 南京农业大学
- 2016-09-26 - 2020-02-14 - C12Q1/70
- 本发明提供了检测H5、H7和H9亚型流感病毒的多重荧光定量PCR引物和探针，所述引物结合探针能采用多重荧光定量PCR同时检测H5、H7和H9亚型流感病毒具体为哪种亚型，不同亚型的引物之间互相没有影响，并且特异性强，检测灵敏度为10～50拷贝数，对靶序列可以准确定量、定性检测，重复性好，可信度高。本发明提供的一种同时检测H5、H7和H9亚型流感病毒的多重荧光定量PCR试剂盒，所述试剂盒检测灵敏度为10～50拷贝数，敏感度高，特异性强。本申请还提供检测方法具有良好的稳定性；采用基因融合的质粒做阳性标准品，避免多次更换阳性标准品的繁琐操作，大大缩短检测时间和检测次数，样品可在2小时内完成检测。
- 用于检测HIV-1对抗病毒药物的抗性的实时PCR点突变分析-201480043185.2
- J·A·约翰逊;W·M·海尼恩;J·T·利普斯科姆;X·魏 - 美国健康及人类服务部
- 2014-06-02 - 2020-02-14 - C12Q1/70
- 公开了包括引物和探针的组合物，其能够与公开的核酸相互作用，如本文公开的编码HIV的逆转录酶、蛋白酶或整合酶的核酸。因此，提供了包括SEQ ID NOS:1‑89、96‑122和124‑151所示的核苷酸序列中的任何一种的寡核苷酸。还提供了由SEQ ID NOS:1‑89、96‑122和124‑151所示的核苷酸组成的寡核苷酸。所公开的寡核苷酸中的每一种是探针或引物。还提供了引物和探针的混合物并用于本文公开的RT‑PCR和初级PCR反应中。提供了用于同时或连续地特异性检测HIV中几个突变的方法。可以使用本文描述的方法检测HIV的逆转录酶、蛋白酶或整合酶中的突变。
- 鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒三重PCR检测引物组、试剂盒及方法-201911056216.9
- 谢芝勋;李丹;李孟;谢丽基;罗思思;张艳芳;张民秀;黄娇玲;范晴;王盛;谢志勤;邓显文;曾婷婷 - 广西壮族自治区兽医研究所
- 2019-10-31 - 2020-02-11 - C12Q1/70
- 本发明公开了鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒三重PCR检测引物组、试剂盒及方法，设计了针对鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的特异性引物，经过对不同引物组合进行试验筛选得到扩增效果较好的一个引物组合，然后继续对反应体系中引物浓度、引物之间的比例、退火温度和扩增时间进行优化，最终建立起可同时检测鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的方法。本发明的引物和检测方法通过一次PCR反应便可同时确定样品中鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的混合感染及单一感染情况，该方法同时具有特异性强、灵敏度高、快速简便及易于操作等优点，十分适于在基层单位应用推广，为鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒的监测及其防控提供技术支撑。
- 非洲猪瘟病毒的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物、检测方法及检测试剂盒-201911302311.2
- 李艳;李春玲;郭怡德;勾红潮;蔡汝健;蒋智勇;宋帅;楚品品;卞志标;徐民生 - 广东省农业科学院动物卫生研究所
- 2019-12-17 - 2020-02-11 - C12Q1/70
- 本发明公开一种非洲猪瘟病毒的锁核酸探针荧光定量PCR检测组合物、检测方法及检测试剂盒，属于分子生物学领域。本发明的检测引物、探针和检测试剂盒，利用锁核酸的特点，设计含有锁核酸的特异性探针，该探针对DNA有强大的识别能力和强大的亲和力，从而能够很好的应用于非洲猪瘟病毒精准检测，提高了非洲猪瘟病毒的检测效率，漏检的概率降低，为非洲猪瘟病毒检测提供了一种新的检测方法和检测试剂。本发明的探针、引物和试剂盒，与现有的常规检测方法相比，具有特异性强、灵敏度高等优点，特别适用于科研及临床应用，具有很好的商业应用价值。
- 区分经典型和韩国型鸭肝炎病毒的实时荧光定量PCR引物-201710029224.9
- 陈珍;万春和;施少华;陈翠腾;朱春华;蔡国漳;刘斌琼;黄瑜 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2017-01-16 - 2020-02-11 - C12Q1/70
- 本发明提供了一组区分经典型和韩国型鸭肝炎病毒的实时荧光定量PCR引物，利用经典型和韩国型鸭肝炎病毒特征性核苷酸序列存在GC含量差异来设计。利用本组引物对经典型和韩国型鸭肝炎病毒进行实时荧光定量PCR反应均可有效扩增，但可在经典型和韩国型鸭肝炎病毒的实时荧光定量PCR反应后生成的熔解曲线存在熔解温度（Tm值）差异来对经典型和韩国型鸭肝炎病毒进行有效区分。配合实时荧光定量PCR仪连接的电脑并利用仪器自带的分析软件，可达到仅需一组引物，即可特异性地对经典型和韩国型鸭肝炎病毒感染情况进行鉴别诊断。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。
- 区分clade 2．3．4和clade 2．3．4．4 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物-201710029418.9
- 万春和;施少华;黄瑜;程龙飞;傅光华;陈红梅;傅秋玲;刘荣昌;陈翠腾 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2017-01-16 - 2020-02-11 - C12Q1/70
- 本发明提供了一组区分clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物，利用clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV血凝素基因（HA）特征性核苷酸序列存在GC含量差异来设计。利用本组引物对clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV进行实时荧光定量PCR反应均可有效扩增，但其在clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV的实时荧光定量PCR反应后生成的熔解曲线存在温度峰值（Tm值）差异来对clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV进行有效区分。配合和实时荧光定量PCR仪器连接的电脑并利用仪器自带的分析软件，可达到仅需一组引物，即可特异性的对clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV感染情况进行鉴别诊断。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。
- 区分clade 2．3．2．1和clade 7．2 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物-201710028994.1
- 施少华;万春和;陈珍;黄瑜;程龙飞;傅光华;陈红梅;傅秋玲;刘荣昌;陈翠腾 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2017-01-16 - 2020-02-11 - C12Q1/70
- 本发明提供了一组区分clade 2.3.2.1和clade 7.2 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物，利用clade 2.3.2.1和clade 7.2 H5 AIV血凝素基因（HA）特征性核苷酸序列存在GC含量差异来设计。利用本组引物对clade 2.3.2.1和clade 7.2 H5 AIV进行实时荧光定量PCR反应均可有效扩增，但其在clade 2.3.2.1和clade 7.2 H5 AIV的实时荧光定量PCR反应后生成的熔解曲线存在熔解温度（Tm值）差异来对clade 2.3.2.1和clade 7.2 H5 AIV进行有效区分。配合和实时荧光定量PCR仪器连接的电脑并利用仪器自带的分析软件，可达到仅需一组引物，即可特异性的对clade 2.3.2.1和clade 7.2 H5 AIV感染情况进行鉴别诊断。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。
- 人源化二肽基肽酶IV(DPP4)动物-201580027887.6
- C·凯拉瑟斯;A·穆伊卡 - 再生元制药公司
- 2015-05-28 - 2020-02-11 - C12Q1/70
- 本发明提供了包含人DPP4核酸序列或人源化DPP4核酸序列的非人动物。描述了包含用人DPP4基因或人源化DPP4基因对内源Dpp4基因进行的置换的非人动物，或者除了内源Dpp4基因之外还包含人DPP4基因或人源化DPP4基因的非人动物。还提供了包含处于人或非人DPP4调控元件控制下的人DPP4基因或人源化DPP4基因的非人动物，包括在内源非人Dpp4基因座处用人DPP4编码序列置换非人Dpp4编码序列的非人动物。提供了包含人DPP4基因或人源化DPP4基因序列的非人动物，其中所述非人动物是啮齿动物，例如小鼠或大鼠。描述了用于制备和使用所述非人动物的方法。
- 新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒检测阳性标准品及其制备方法与应用-201911131530.9
- 袁小远;张玉霞;孟凯;杨金兴;徐怀英;金维江;亓丽红;艾武 - 山东省农业科学院家禽研究所
- 2019-11-19 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明属于分子生物学检测领域，具体涉及一种新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒检测阳性标准品及其制备方法与应用。筛选H9N2亚型禽流感病毒的扩增引物及新城疫病毒的扩增引物，扩增后的目的片段与载体连接，筛选验证阳性重组质粒，计算阳性标准品浓度，绘制标准品曲线，实现定性及定量测定；最后通过稳定高效的阳性标准品的制备和应用，实现待测样品的定性和定量检测，非常适用于H9N2亚型禽流感病毒和新城疫病毒的诊断。
- 一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检验方法及其应用-201911201728.X
- 吴建国;刘为勇;刘映乐;谭秋萍 - 广东龙帆生物科技有限公司
- 2019-11-29 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检验方法及其应用。本发明针对副肠孤病毒3型特异性的保守基因序列的相同或相似区段设计出一对特异性引物和一条特异性的荧光探针，同时采用人内源性Rnase P基因作为内参基因，采用Rnase P特异性引物和探针检测标本中内参基因RNA，利用实时荧光定量PCR技术能够更快速、准确且灵敏地检测出副肠孤病毒3型，特异性强、灵敏度高，在进行病毒定性分析的同时还能进行病毒定量分析，定量线性范围好；操作简单、易于推广；实验结果重复性好，精密度高；能通过内参基因的检测结果对样本的提取和扩增整个过程进行质量监控。
- 一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针、试剂盒以及检测方法-201911245018.7
- 杨鑫;翟亚如;王红宁;马鹏;李豪;崔鹏飞;张兰 - 四川大学
- 2019-12-06 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种基于RPA方法快速检测非洲猪瘟病毒的引物组和探针、试剂盒以及检测方法，引物组和探针包括引物组和探针Probe；所述引物组包括正向引物RPA‑F和反向引物RPA‑R；引物组和探针Probe的总扩增产物大小为267bp；所述试剂盒，包括所述的引物组和探针；所述检测方法包括步骤：合成引物组和探针；RPA‑LFD检测方法的建立。本发明不需要复杂精细的仪器设备，减少了资金的投入；实施过程简单易操作，不需要专门的检测人员就可以现场进行检测；检测快速准确，能够实现非洲猪瘟的现场可视化检测，对非洲猪瘟病毒的防控具有重要的意义。
- 一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂、试剂盒和检测方法-201911276696.X
- 王金涛;孙东波;宋伟红;郑家三;李春秋;邢晓旭;陈国福;刘光前;师庆伟;佟玲;刁彩霞 - 黑龙江八一农垦大学;黑龙江省农垦科学院
- 2019-12-12 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂、试剂盒和检测方法，属于动物病原检测领域。本发明针对猪瘟病毒5’‑UTR基因和非洲猪瘟病毒P72基因，分别设计并筛选出能覆盖所有毒株，又适合双重检测的引物和探针，包括二对特异性引物和二条特异性探针；本发明还记载了包含该引物和探针的试剂盒以及利用该引物和探针的PCR检测方法；本发明通过引物设计和PCR各组分的调整，在敏感性和特异性均不降低的前提下，实现一次分析，同时检测和区分猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒的目的，不仅减少了检测的工作量和成本，且能大大节省检测的时间，为疫病防治赢得宝贵时间。
- 一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒和方法-201911296373.7
- 朱峰;朱鹏翔;纪兆林 - 扬州大学
- 2019-12-16 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒和方法，本发明采用环介导等温技术，并根据Genebank中已提交的WVMV基因的CP序列设计引物，获得LAMP引物组，所述的LAMP引物组包括F3、B3、FIP和BIP四种引物，该试剂盒还包括LAMP反应基础液，LAMP反应基础液和LAMP引物组构成了检测体系，该试剂盒能够简单快速地检测到紫藤脉花叶病毒，其具有快速、灵敏、特异性强等优势，克服了传统技术中的一些不足。应用本发明提供的方法检测WVMV全程可在两个小时内完成，LAMP反应在恒温水浴锅中进行，不需要繁琐的实验步骤及昂贵的分子试剂及仪器。
- 乙型肝炎病毒miR-3和人肝脏特异性miR-122三重荧光定量PCR检测试剂盒-201811480995.0
- 张旻;龚国忠;肖新强;宋德业 - 中南大学湘雅二医院
- 2018-12-05 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明提供了一种乙型肝炎病毒miR‑3和人肝脏特异性miR‑122三重荧光定量PCR检测试剂盒，其包括乙型肝炎病毒miR‑3的逆转录引物如SEQ ID NO.1所示、荧光探针如SEQ ID NO.2所示、PCR引物如SEQ ID NO.3和4所示，还可以进一步包括人肝脏特异性miR‑122的逆转录引物如SEQ ID NO.5所示、荧光探针如SEQ ID NO.6所示、PCR引物如SEQ ID NO.7和8所示，还可以进一步包括内参逆转录引物如SEQ ID NO.9所示、荧光探针如SEQ ID NO.10所示、PCR引物如SEQ ID NO.11和12所示。该试剂盒使用三重荧光定量PCR的方法从微量(100μl)血清或血浆中检测乙型肝炎病毒miR‑3和人肝脏特异性miR‑122的浓度，检测方法特异、高效、灵敏。该试剂盒能够用于乙型肝炎病毒复制情况的监控、抗病毒药物疗效和预后的评估和肝脏损伤的评测，具有重要的临床意义。
- 区分clade 7．2和clade 2．3．4．4 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物-201710029225.3
- 施少华;万春和;陈珍;黄瑜;程龙飞;傅光华;陈红梅;傅秋玲;刘荣昌;陈翠腾 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2017-01-16 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明提供了一组区分clade 7．2和clade 2．3．4．4 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物，利用clade 7.2和clade 2.3.4.4 H5 AIV血凝素基因（HA）特征性核苷酸序列存在GC含量差异来设计。利用本组引物对clade 7.2和clade 2.3.4.4 H5 AIV进行实时荧光定量PCR反应均可有效扩增，但其在clade 7.2和clade 2.3.4.4 H5 AIV的实时荧光定量PCR反应后生成的熔解曲线存在熔解温度（Tm值）差异来对clade 7.2和clade 2.3.4.4 H5 AIV进行有效区分。配合和实时荧光定量PCR仪器连接的电脑并利用仪器自带的分析软件，可达到仅需一组引物，即可特异性的对clade 7.2和clade 2.3.4.4 H5 AIV感染情况进行鉴别诊断。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。
- 区分clade 2．3．2．1和clade 2．3．4．4 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物-201710029237.6
- 施少华;万春和;陈珍;黄瑜;程龙飞;傅光华;陈红梅;傅秋玲;刘荣昌;陈翠腾 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2017-01-16 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明提供了一组区分clade 2.3.2.1和clade 2.3.4.4 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物，利用clade 2.3.2.1和clade 2.3.4.4 H5 AIV血凝素基因（HA）特征性核苷酸序列存在GC含量差异来设计。利用本组引物对clade 2.3.2.1和clade 2.3.4.4 H5 AIV进行实时荧光定量PCR反应均可有效扩增，但其在clade 2.3.2.1和clade 2.3.4.4 H5 AIV的实时荧光定量PCR反应后生成的熔解曲线存在熔解温度（Tm值）差异来对clade 2.3.2.1和clade 2.3.4.4 H5 AIV进行有效区分。配合和实时荧光定量PCR仪器连接的电脑并利用仪器自带的分析软件，可达到仅需一组引物，即可特异性的对clade 2.3.2.1和clade 2.3.4.4 H5 AIV感染情况进行鉴别诊断。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。
- 区分clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV的实时荧光定量PCR引物-201710029006.5
- 万春和;施少华;黄瑜;程龙飞;傅光华;陈翠腾;陈红梅;傅秋玲;刘荣昌 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2017-01-16 - 2020-02-07 - C12Q1/70
- 本发明提供了一组区分clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV实时荧光定量PCR引物，利用clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV血凝素基因（HA）特征性核苷酸序列存在GC含量差异来设计。利用本组引物对clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV进行实时荧光定量PCR反应均可有效扩增，但其在clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV的实时荧光定量PCR反应后生成的熔解曲线存在熔解温度（Tm值）差异来对clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV进行有效区分。配合和实时荧光定量PCR仪器连接的电脑并利用仪器自带的分析软件，可达到仅需一组引物，即可特异性的对clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV感染情况进行鉴别诊断。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。
- 不同地区玉米粗缩病病原物的遗传变异分析方法-201910936016.6
- 铁双贵;岳润清;赵志杰;刘璐;陈娜;徐心志;卢董华 - 河南省农业科学院
- 2019-09-29 - 2020-02-04 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种不同地区玉米粗缩病病原物的遗传变异分析方法，旨在解决现有技术中遗传变异分析方法仍不够准确、不够完整客观的技术问题。该遗传变异分析方法包括：取不同地区叶片样本提取叶片总RNA；以总RNA为模板进行反转录，得cDNA；以cDNA为模板进行RT‑PCR；将各RT‑PCR扩增产物纯化回收后测序，分析比对出可信序列；将各可信序列与RBSDV的S9序列进行比对分析样本的同源性、碱基突变、氨基酸的改变情况。本发明能够明确致病原RBSDV在我国不同地区的遗传变异情况，还可以进一步地揭示病毒的侵染传毒机制，对研究和控制各地区病害的发生意义重大。
- 一种禽传染性支气管炎QX型病毒野毒与疫苗毒的鉴别方法-201911193522.7
- 宋姗姗;刘东;刘红祥;李彬;王群义;张翔;刘丰波;任衍倍;杜元钊 - 青岛易邦生物工程有限公司
- 2019-11-28 - 2020-02-04 - C12Q1/70
- 本发明提供了一种禽传染性支气管炎QX型野毒株与疫苗毒株的鉴别引物和鉴别方法，本发明利用禽传染性支气管炎QX型野毒与疫苗毒的序列差异，筛选出特异性的4条引物序列，建立鉴别QX型禽传染性支气管炎野毒和疫苗毒的双重RT‑PCR方法。本发明所述鉴别方法无需依赖深厚的专业背景，也无需借助昂贵的精密仪器，具有准确快捷、客观公正、经济实用的特点。
- 一种同步检测SPVG、SPLV和SPMMV的方法-201710182795.6
- 兰平秀;李如慧;李凡;李月月;谭冠林;马向丽;陈小姣;马龑;谭松涛;熊锋;何英云 - 云南农业大学
- 2017-03-24 - 2020-02-04 - C12Q1/70
- 本发明涉及一种同步检测SPVG、SPLV和SPMMV的方法，属于植物保护领域；通过分别设计合成SPVG、SPLV和SPMMV的正向引物、反向引物和探针，建立同时检测三种病毒的实时荧光多重RT‑PCR方法，检测植物细胞色素氧化酶基因（COX）的引物和探针被作为内参纳入实时荧光多重RT‑PCR的体系构建，避免因模板核酸质量差导致的假阴性结果。本发明对SPVG的检测灵敏度达到10
- 一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法-201611174200.4
- 李凡;李月月;谭冠林;肖龙;马龑;熊锋;兰平秀;陈小姣;何英云;谭松涛 - 云南农业大学
- 2016-12-19 - 2020-02-04 - C12Q1/70
- 本发明属于分子生物学和病毒学技术领域，具体涉及一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法；所述的烟草花叶病毒属病毒通用检测引物对序列为：正向引物TobamodF：5’‑TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG‑3’，反向引物TobamodR：5’‑ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT‑3’；本发明中的检测引物是基于烟草花叶病毒属中的32种病毒基因组保守区序列进行设计，用该属中的7种病毒对该对引物进行扩增效果验证，扩增效果均较好；从而建立了一种能够检测至少7种烟草花叶病毒属病毒的通用检测引物及方法，且具有检测效率高、灵敏度高、成本低的特点。
- 一种冻干型猪瘟病毒核酸标准物质的制备方法及其检测方法-201910915460.X
- 冯小宇;梅力;高晓龙;陈晨;王英超;郑淑芸;韦海涛;宋彦军;赵景义;王林;沈光年;罗伏兵;邓柏林 - 北京市动物疫病预防控制中心
- 2019-09-26 - 2020-01-31 - C12Q1/70
- 本发明提供了一种冻干型猪瘟病毒核酸标准物质的制备方法及其检测方法，包括如下步骤：制备猪瘟病毒C株的病毒液，灭活，得到灭活的病毒液；然后将灭活的病毒液和保护剂混合，冻干，得到猪瘟病毒核酸标准物质。其检测方法以推进猪瘟病毒核酸分子检测标准化及我国猪瘟病毒体外诊断试剂的量值溯源和检测结果一致化。猪瘟病毒核酸标准物质不仅可为兽医实验室开展量值溯源、能力验证、质量控制、方法评价、试剂选择等工作提供技术支撑，还能提高全国不同类型兽医检测实验室的检测能力和技术水平，更为动物疫病净化和畜产品质量安全评价、身份验证、国内监管、进出口检验、企业自控和国际贸易互认提供有力保障。
- 非洲猪瘟TaqMan实时荧光定量PCR检测引物及试剂盒-201911216202.9
- 高飞;童光志;杜楠楠;郑浩;童武;李国新;姜一峰 - 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
- 2019-12-02 - 2020-01-31 - C12Q1/70
- 本发明提供了一种非洲猪瘟TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂，本发明建立基于ASFV p17蛋白的编码基因D177L的TaqMan实时荧光定量PCR检测体系，通过条件优化得到较为理想的扩增曲线和检测效果，与传统PCR检测方法相比，具有特异性更强、灵敏度更高、重复性更好、自动化程度更高反应更快等优点，且不需要电泳及紫外检测耗时更短、结果更加直观。
- 快速检测猪细小病毒的实时荧光RPA试剂盒、试纸条RPA试剂盒及其用途-201610049300.8
- 杨洋;张志东;秦晓东 - 中国农业科学院兰州兽医研究所
- 2016-01-25 - 2020-01-31 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种快速检测猪细小病毒(PPV)的实时荧光RPA(PPV real‑time RPA)试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测PPV的试纸条RPA(LFS RPA)试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为10
- 一种联合检测多种性病病原体DNA的方法-201610292171.5
- 黄劭;钟田雨;张家剑 - 江西南兴医疗科技有限公司;赣南医学院第一附属医院;江西耀阳医疗科技有限公司
- 2016-05-05 - 2020-01-31 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种联合检测多种性病病原体DNA的方法，以提取的待测性病病原体样本的基因组DNA作为模板，GP和GPSP引物作为扩增引物，特异性探针作为探针、IAC质粒作为内控对照，进行多重PCR反应，得到PCR产物；实时监测荧光值的变化，计算荧光值与温度的负导数，获得特异性探针与PCR产物的熔解曲线，得出熔点Tm值，通过特异性探针标记的荧光通道及Tm值确定相应的感染的性病病原体。本发明的检测方法可以同时定性检测沙眼衣原体、淋球菌、生殖支原体、阴道毛滴虫、HSVI、HSVII、解脲脲原体、微小脲原体、人型支原体共9种常见性病病原体DNA，检测性病病原体多，方法简单。
- 检测人类乳头瘤病毒的试剂、方法及应用-201910981864.9
- 王先磊;王伟伟;李杨霞;晁春江;贾俊玲;曾丽;杨淼 - 浙江默乐生物科技有限公司;江苏默乐生物科技股份有限公司
- 2019-10-16 - 2020-01-24 - C12Q1/70
- 本发明涉及疾病筛查技术领域，具体涉及用于检测人类乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的试剂、方法及应用。该方法包括：在同一PCR反应管中，使用两条简并引物和多个探针进行荧光定量PCR；其中，所述两条简并引物可用于扩增至少24个亚型HPV；所述多个探针包括用于检测低危亚型HPV的探针、用于检测高危亚型HPV的探针、用于检测中度高危亚型HPV的探针；所述用于检测低危亚型HPV的探针、所述用于检测高危亚型HPV的探针、所述用于检测中度高危亚型HPV的探针分别对应不同的荧光通道。
- 人腺病毒和博卡病毒荧光定量PCR检测方法及其应用-201911010594.3
- 王健伟;任丽丽;肖艳;郭丽;李建国 - 中国医学科学院病原生物学研究所
- 2019-10-22 - 2020-01-24 - C12Q1/70
- 本发明提供了可用于人腺病毒和博卡病毒所致疾病检测的荧光定量PCR的引物和探针；在一个实施方案中，所述引物和探针的序列如SEQ ID NOs：1‑3所示或如SEQ ID NOs：4‑6所示。本发明还提供了所述引物和探针或其组合用于制备检测样品中人腺病毒和/或博卡病毒的试剂的用途。
- 人冠状病毒和呼吸道合胞病毒荧光定量PCR检测方法及其应用-201911011029.9
- 王健伟;任丽丽;肖艳;郭丽;李建国 - 中国医学科学院病原生物学研究所
- 2019-10-22 - 2020-01-24 - C12Q1/70
- 本发明提供了可用于人冠状病毒和呼吸道合胞病毒所致疾病检测的荧光定量PCR的引物和探针或其组合。在具体实施方案中，所述引物和探针的序列如SEQ ID NOs：1‑3所示，和/或如SEQ ID NOs：4‑6所示，和/或如SEQ ID NOs：7‑9所示。本发明还提供了所述引物和探针或其组合用于制备检测样品中人冠状病毒OC43、人冠状病毒HKU1和/或呼吸道合胞病毒RSVB的试剂的用途。
- 含HPV整合位点的基因及其应用-201911048745.4
- 孟博;郎继东;董如一;杨文娟;王伟伟;田埂 - 元码基因科技(北京)股份有限公司
- 2019-10-30 - 2020-01-24 - C12Q1/70
- 本发明公开含HPV整合位点的基因及其应用。该基因包括来源于人乳头瘤病毒基因组的A基因的序列和来源于人基因组的B基因的序列，且A基因的序列与B基因的序列在整合位点进行融合。本发明鉴定了许多未被报道的HPV病毒在人基因组的整合位置信息，属于首次针对筛查样本进行的HPV整合位点的检出。本发明中检出的HPV整合位点可作为对于HPV感染状态和宫颈癌发展状态的潜在分子标志物，未来可应用于宫颈癌的早期评估及个性化疾病监控和预后评估等方向，具有重要临床应用价值。
- 专利分类
