[发明专利]一种人工提纯与保存羊栖菜受精卵干纯品的方法

摘要

本发明提出了一种人工提纯与保存羊栖菜受精卵干纯品的方法，包括如下操作步骤：羊栖菜种菜选取与育苗池暂养，羊栖菜受精卵收集与浓缩，羊栖菜受精卵定量封装与冷藏，羊栖菜受精卵的解冻，羊栖菜受精卵清洗与除杂，羊栖菜受精卵初纯品脱盐、脱水与浓缩，羊栖菜受精卵初纯品低温冻干，羊栖菜受精卵干初品除杂和羊栖菜受精卵干纯品定量封装与保存等9项内容，本发明可为以羊栖菜受精卵干纯品为实验材料，实施组学技术研究和有效天然产物提取研究，提供科学、规范的人工提存与保存操作方法。

主权项

1.一种人工提纯与保存羊栖菜受精卵干纯品的方法，其特征在于包括以下步骤：S1、羊栖菜种菜选取与育苗池暂养，该步骤S1具体包括以下子步骤S1‑1:待羊栖菜生殖托上的生殖窝较集中并呈现肉眼可见凸起，且伴有气泡释放时，人工采集上述特征羊栖菜雌、雄侧生枝作为羊栖菜种菜，且雌侧生枝与雄侧生枝的数量比≥10:1；S1‑2：将人工采集的羊栖菜种菜放置事先注入新鲜过滤海水且水深深度为20cm‑35cm的苗池中,均匀分散漂浮池水表层羊栖菜种菜，避免种菜相互叠加；S1‑3:羊栖菜种菜育苗池暂养期间，根据光照强度50μmol/m2/s‑250μmol/m2/s和光周期12:12，合理调控遮阳设施和新鲜海水注入量，苗池内表层海水5cm‑10cm,温度调控在22℃‑25℃，防止水温过高引起种菜腐烂，影响精卵集中释放和受精，每隔3小时‑5小时翻动池内种菜1次，使雌、雄种菜混合均匀，并接受均匀的光照；S1‑4:羊栖菜种菜经苗池暂养18小时‑42小时，待雌、雄生殖托集中释放卵子和精子，完成受精且受精卵集中沉降育苗池底部后，人工去除种菜；S2、羊栖菜受精卵收集与浓缩，具体包括有：将事先准备好的杂质过滤纱绢网袋、羊栖菜受精卵收集网袋、羊栖菜受精卵收集网袋外层保护纱绢网袋按由内向外的顺序叠加套固于苗池排水口处，其中，杂质过滤纱绢网袋的参数为50目、宽：25cm、长：50cm；羊栖菜受精卵收集网袋的参数为260目、宽：25cm、长：200cm；羊栖菜受精卵收集网袋外层保护纱绢网袋的参数为50目、宽：25cm、长：200cm；打开苗池排水阀，自然排水，人工搅动苗池内海水，使沉降池底部的受精卵伴随海水流出，羊栖菜受精卵全部收集完毕后，保持网袋叠加顺序，用过滤新鲜海水充分冲洗过滤纱绢网，取出杂质过滤纱绢网袋；过滤新鲜海水清洗羊栖菜受精卵收集网袋内壁，使挂壁羊栖菜受精卵集中于网袋底部，人工排除多余水分，至没有明显海水滴出为止，使受精卵集中形成团块状；S3、羊栖菜受精卵定量封装与冷藏，具体包括：定量称取300g羊栖菜受精卵，置封口袋中，排出袋中多余空气，均匀展平；将装有受精卵的封口袋置液氮中充分冷冻后，置‑80℃超低温冰箱长期保存；待全部羊栖菜受精卵回收后，清洗、回收杂质过滤纱绢网袋、羊栖菜受精卵收集网袋和羊栖菜受精卵收集网袋外层保护纱绢网袋；S4、羊栖菜受精卵的解冻，具体包括：定量取出‑80℃超低温冰箱冷藏的羊栖菜受精卵，转置‑40℃冰箱中置放24h，取出后置‑20℃冰箱中置放24h，再置4℃条件下置放12h，最后置2倍体积4℃过滤海水冰和水混合液中，缓慢搅拌至充分融化，得到羊栖菜受精卵悬浮液；S5、羊栖菜受精卵清洗与除杂，具体包括：将装有羊栖菜受精卵悬浮液的器皿置4℃冰水混合液中，自然沉降羊栖菜受精卵悬浊液5min‑7min，取事先准备好的0.5L‑2L规格并去掉针头的注射器，缓慢吸取上层混有藻泥、勾虾、似竹节虾及残体等杂质的悬浊液，至羊栖菜受精卵沉降层3mm‑5mm后，再重新加入2倍‑4倍体积4℃过滤海水，重新搅拌均匀，再自然沉降5min‑7min，用0.5L‑2L规格并去掉针头的注射器再次吸取上层含杂质的悬浊液，此操作循环6次‑8次，至上层液清澈，将羊栖菜受精卵与清澈海水搅匀成悬浮液，用0.5L‑2L规格并去掉针头的注射器吸取悬浮液，转移置事先上层固定80目纱绢网，并置放于4℃冰水混合液中的器皿中，筛滤羊栖菜受精卵，去除混合于羊栖菜受精卵中≥80目的沙粒、无生命动物及残体等杂质，过滤海水充分清洗器皿和80目纱绢网，充分回收羊栖菜受精卵；S6、羊栖菜受精卵初纯品脱盐、脱水与浓缩，具体包括：将羊栖菜受精卵与4℃过滤海水混合液，自然沉降5min‑7min，用0.5L‑2L规格并去掉针头的注射器吸取移除上清液，加入2倍‑4倍体积4℃超纯淡水，搅匀混合液，自然沉降5min‑7min，再移除上清液，此操作循环3次‑4次；重新加入2倍‑4倍体积4℃超纯淡水，搅匀混合液，用0.5L‑2L规格并去掉针头的注射器吸取混合液，转移置事先上层固定270目‑280目纱绢网，并置放于4℃冰水混合液中的器皿中，过滤羊栖菜受精卵，超纯淡水充分清洗器皿和270目‑280目纱绢网，充分回收羊栖菜受精卵，手工拧压270目‑280目纱绢网，去除多余水分，使羊栖菜受精卵集中成团块状；然后定量称取羊栖菜受精卵鲜品，置适封口袋中，手工压块成小颗粒分散状态，标记质量、时间和基本实验条件信息，将装有羊栖菜受精卵的封口袋置液氮中充分冷冻，取出后置‑80℃超低温冰箱短期冷藏24h‑48h或长期冷藏；S7、羊栖菜受精卵低温冻干，具体包括：取出‑80℃超低温冰箱短期冷藏24h‑48h或长期冷藏的羊栖菜受精卵，记录鲜重质量，置‑105℃条件下冻干至恒重，回收羊栖菜受精卵干初品，称量并记录干重，定量分装置封口袋，记录时间、重量和冷冻时间信息，置‑80℃超低温冰箱冷藏；S8、羊栖菜受精卵干初品除杂以5g、100g、20g或50g的规格定量取出羊栖菜受精卵干初品，22℃环境温度条件下，经150目‑160目纱绢网筛滤，去除大于150目‑160目沙粒、勾虾、似竹节虾及残肢等杂质，回收小于150目‑160目羊栖菜受精卵干品，镜检羊栖菜受精卵干品和杂质；将回收后的羊栖菜受精卵干品置290目‑300目纱绢网筛滤，分别回收290目‑300目以上羊栖菜受精卵干纯品和290目‑300目以下过滤颗粒，该过滤颗粒为假根丝状体，镜检羊栖菜受精卵干纯品和假根丝状体；S9、羊栖菜受精卵干纯品定量封装与保存以5g、100g、20g或50g的规格定量分装羊栖菜受精卵干纯品和假根丝状体，标记质量、时间和基本实验操作信息，置‑80℃超低温冰箱冷藏保存。