[发明专利]一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法

摘要

本发明公开了一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法，从洞庭湖水系精选性状优异的野生原系黄颡鱼及瓦氏黄颡鱼，同步应用细胞工程遗传育种技术，对野生原系品种提纯复壮，选育出纯系黄颡鱼及纯系瓦氏黄颡鱼全雌鱼；以纯系瓦氏全雌鱼为原料鱼，研发优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼；并建立纯系全雌鱼和超雄鱼种质库。对原种不断提纯复壮，确保种苗纯正、遗传基因稳定可控。优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼与纯系黄颡鱼全雌鱼组合，大规模人工繁殖纯系全雄杂交黄颡鱼鱼苗。本发明从亲本源头上彻底解决了杂交黄颡鱼种质代代退化、生长优势下降、抗病抗逆力弱等难题，从苗种开始，养殖全过程基本不用药，确保了食品安全。

主权项

1.一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)建立纯系黄颡鱼全雌鱼种质库，将野生原系黄颡鱼雌鱼经过连续两代雌核发育，令其基因位点完全结合，产生纯系全雌黄颡鱼，并建立纯系黄颡鱼全雌鱼种质库，其中，第一代雌核发育包括以下步骤：A、遗传物质灭活的异源精子的制备，将取自珠江水系的大口鲶雄鱼按每公斤体重注射LHRH‑A2 5‑10μg催熟，10小时后人工取精2g，用精子保存液稀释5倍，搅匀并平铺在玻璃器皿上，厚度不超过0.5mm，置于微型振荡器上，启动微型振荡器，用波长2537埃的紫外线灯作辐射源，照射25min，从而获得遗传失活的异源精子；B、鱼卵的收集与授精,将从“八百里洞庭”湖区垂钓渔船上选取的野生原系黄颡鱼雌鱼按每公斤体重注射LHRH‑A2 12μg，DOM 3mg、HCG 600IU，生理盐水2ml；亲鱼暂养水为锦江水库中层水，水温控制到28℃，12—15小时后挤压鱼腹，收集鱼卵；抽取上述遗传失活的异源精子加入鱼卵中，混匀，再加入精子激活液，搅拌均匀，授精工作即完成；C、雌核二倍体的诱导，上述人工授精时，异源精子不参与受精卵的发育，只有雌鱼鱼卵发育而产生单倍体，而单倍体苗是无法存活的，为此，通过冷休克方法，阻断减数分裂第二极体排出而诱导出雌核二倍体，由于黄颡鱼的性别控制机制为雄性配子异型，雌性配子同型，所以♀XX雌核发育子代为全雌子代；第二代雌核发育：将第一代雌核发育子代培育至性成熟后，按上述方法进行第二次雌核发育，选育出基因位点完全纯合的纯系黄颡鱼全雌子代；纯系黄颡鱼全雌鱼种质库的建立：第二次雌核发育获得的纯系黄颡鱼全雌鱼♀XX，开口6天后，取出其中500尾进行人工转性，获得具有正常生育能力的生理雄鱼♂XX；纯系全雌鱼♀XX和生理雄鱼♂XX培育至性成熟后，杂交扩群，建立纯系黄颡鱼全雌鱼种质库，大量生产纯系黄颡鱼全雌鱼供大规模繁殖纯系全雄杂交黄颡鱼作母本；(2)建立纯系瓦氏黄颡鱼全雌鱼种质库，选育纯系瓦氏黄颡鱼全雌鱼♀XX，并建立纯系瓦氏全雌鱼种质库，其操作过程与上述纯系黄颡鱼全雌鱼相同，仅是亲鱼由野生原系黄颡鱼雌鱼改为野生原系瓦氏黄颡鱼雌鱼；(3)优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼的研发及其种质库的建立，包括以下步骤：A、优质瓦氏黄颡鱼生理雌鱼的制种,选取发育良好的纯系瓦氏黄颡鱼全雌鱼♀XX与种质特别优秀的野生原系瓦氏黄颡鱼雄鱼♂XY交配繁殖，孵化出优质瓦氏黄颡鱼子代♀XX与♂XY,鱼苗开口第六天，取出1000尾瓦氏黄颡鱼水花独立培育，用浓度为150μg/L的17—α乙炔基雌二醇浸泡1小时后的丰年虫活饵料进行喂食，一日3餐，连喂50天，之后用常规饲料投喂至性成熟,这批转性的瓦氏黄颡鱼中，生理雌鱼和普通雌鱼各占50％；B、测交选出优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼♂YY和超雄生理雌鱼♀YY,从上述直接培育成熟的优质瓦氏黄颡鱼中，选取2—3尾个体最大，外型特征最优秀、性腺发育最成熟的雄鱼♂XY，解剖取出精巢，磨碎，加精子保存液配成1:3的稀释精液，密封放到4℃冰箱中保存备用；另外从上述转性后培育成熟的优质瓦氏黄颡鱼雌鱼中，选取20尾个体最大、外形特征最优秀、性腺发育最成熟的伪雌鱼，催产后分别挤出鱼卵，与上述准备好的精子独立进行人工授精，将鱼卵均匀铺在网片上独立孵化；当鱼苗孵化出膜后，每一尾母鱼产的鱼苗都做好记录，独立培育，不能混杂；开口第6天后，将这20尾亲鱼产的水花随意取出200尾，分成A、B两组，每组100尾，A组用常规饲料直接喂养，B组用药饵雌性化后继续饲养；饲养3个月后，分别统计各组的雌雄数量，若雌雄各半，则该组母本性染色体基因为♀XX，淘汰A组和B组；若组一子代中，雄性占75％，雌性占25％，则这组苗的母本性染色体基因为♀XY，保留A、B两组；将保留子代分别放入1m2、深0.6m的30目小网箱培育，网箱设置在水质较好的鱼塘中；养殖至性成熟后，将未转性的子代中母鱼淘汰，其余作为实验的父本，分别与瓦氏黄颡鱼母鱼♀XX测交，若子代公母各半，则父本性染色体基因为♂XY；若子代全部是雄鱼，则父本基因为♂YY；雌性化的子代养殖至性成熟作为实验的母本，分别与瓦氏黄颡鱼雄鱼♂XY进行测交，若子代雌雄各半，则实验母本的性染色体基因为♀XX；若子代雌雄比例为1:3，则实验母本的性染色体基因为♀XY；若子代全部为雄性，则实验母本的性染色体基因为♀YY；测交选出的♂YY与♀YY交配繁殖，子代全部都是瓦氏黄颡鱼超雄鱼，当培育至第6天后，取出部分幼苗进行雌性化处理，养至性成熟后，与♂YY交配扩群，组建成优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼种质库，将优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼♂YY与步骤(1)获得的纯系黄颡鱼雌鱼♀XX交配繁殖，即可获得纯系全雄杂交黄颡鱼♂XY。