[发明专利]一种CDK9/CyclinT1酶活性的快速检测方法及其应用在审
| 申请号： | 201910485833.4 | 申请日： | 2019-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN110218768A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 石榴;徐燕华 | 申请（专利权）人： | 武汉合研生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种CDK9/CyclinT1酶活性的快速检测方法及其应用。该检测方法利用CDK9/CyclinT1酶在分子水平可以将底物磷酸化的原理，结合ADP‑Glo这种灵敏度非常高的技术，直接测定反应中消耗的ATP的量来定量反应的进程。整个反应可以在普通实验室条件下操作，不需要同位素实验室条件，降低了对操作人员和环境可能造成的辐射危险，安全性高。同时，该方法操作简单易行，整个反应可以在一天操作完成全部实验，大大缩短了检测时间，也能提高单次检测的数据量，更适合用于大量的化合物活性评价实验。因此，该方法可应用于CDK9/CyclinT1酶受体抑制剂的筛选和用于此靶点相关的抗肿瘤药物的筛选。 | ||
| 搜索关键词： | 快速检测 酶活性 应用 筛选 底物磷酸化 化合物活性 抗肿瘤药物 实验室条件 受体抑制剂 操作完成 单次检测 分子水平 直接测定 灵敏度 数据量 检测 靶点 消耗 辐射 进程 | ||
【主权项】：
1.一种CDK9/CyclinT1酶活性的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待测样品、空白对照品、阳性对照品分别与CDK9/CyclinT1酶试剂、PDKTide/ATP混合液共孵育进行激酶反应产生ADP；(2)向步骤(1)的三组激酶反应体系中分别添加ADP‑GloTM反应试剂共孵育，终止激酶反应并消耗完剩余ATP；(3)向步骤(2)的三组反应体系中分别添加激酶检测试剂共孵育，使ADP转化成ATP，并读取新合成的ATP的发光值RLU；(4)按酶活＝(RLU(Sample)‑RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)‑RLU(Blank))×100％计算CDK9/CyclinT1酶的活性；其中RLU(Pos.Ctrl)为空白对照品与CDK9/CyclinT1激酶反应的激酶读值，RLU(Blank)为待测样品中未添加CDK9/CyclinT1酶时激酶读值。
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