[发明专利]一种纯化重组人源细胞株蛋白的方法在审
| 申请号： | 201911005466.X | 申请日： | 2019-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN110642921A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 董文其;李珍 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学 |
| 主分类号： | C07K1/36 | 分类号： | C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C12N15/70 |
| 代理公司： | 11569 北京高沃律师事务所 | 代理人： | 瞿晓晶 |
| 地址： | 510515 广东省广州市白云区沙太南*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供了一种纯化重组人源细胞株蛋白(rhCygb)的方法，涉及蛋白纯化技术领域。本发明所述方法，将含有重组人源细胞株蛋白的细菌培养液依次经过除盐柱、阴离子层析柱、复合阴离子层析柱和疏水柱，再重复经过除盐柱、阴离子层析柱和复合阴离子层析柱，最后再经过凝胶过滤柱。本发明所述方法，可有效去除绝大多数带有负电荷的宿主蛋白质和核酸，使其对后续的纯化步骤的影响降到最低；去除与目的蛋白质电荷性质、疏水性相近的杂蛋白；去除绝大多数色素类物质，最后去除痕量杂蛋白及相关物质，最终使产品纯度达到95％以上。本发明所述方法所采用的层析方法容易放大至大规模生产条件下使用，满足工业生产的需要。 | ||
| 搜索关键词： | 去除 阴离子层析柱 复合阴离子 人源细胞 层析柱 杂蛋白 除盐 蛋白 蛋白纯化技术 蛋白质电荷 凝胶过滤柱 色素类物质 宿主蛋白质 细菌培养液 产品纯度 负电荷 疏水性 疏水柱 层析 核酸 痕量 放大 重复 | ||
【主权项】：
1.一种纯化重组人源细胞株蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将含有重组人源细胞株蛋白的细菌培养液过除盐柱后，采用等度洗脱方法收集洗脱峰，得第一洗脱液；/n(2)将所述第一洗脱液流过阴离子交换层析柱，采用等度洗脱方法收集洗脱峰，得第二洗脱液；/n(3)将所述第二洗脱液流过复合阴离子层析柱，采用等度洗脱方法收集洗脱峰，得第三洗脱液；/n(4)将所述第三洗脱液流过疏水层析柱，采用等度洗脱方法收集洗脱峰，得第四洗脱液；/n(5)将所述第四洗脱液重复步骤(1)～(4)的过柱和洗脱步骤，得含有重组人源细胞株蛋白的培养液；/n(6)将所述含有重组人源细胞株蛋白的培养液流过凝胶过滤柱，采用等度洗脱方法收集洗脱峰，置换于缓冲液中，得纯化重组人源细胞株蛋白。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南方医科大学，未经南方医科大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201911005466.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种蛋白分离用振动装置
- 下一篇：一类甲硝唑接丝氨酸二肽化合物及其制备与应用
- 同类专利
- 一种具有降血脂功效的绿豆蛋白的制备方法-201610524319.3
- 任贵兴;么杨;桑伟 - 中国农业科学院作物科学研究所
- 2016-07-05 - 2020-02-07 - C07K1/36
- 本发明公开了一种具有降血脂功效的绿豆蛋白的制备方法，包括以下步骤：1)取清洗干净的绿豆，粉碎过筛，浸泡除脂，烘干，磷酸盐缓冲液提取，离心收集上清，盐析，得绿豆蛋白粗提液；2)将步骤1)得到的绿豆蛋白粗提液进行阴离子交换层析，分别收集280nm检测线的洗脱峰；3)将步骤2)得到的洗脱峰分别进行体外胆酸结合率测定，收集结合率最高的目的峰，即为目的蛋白。根据本发明的制备方法能够制得具有功效的绿豆蛋白，而且经过DEAE‑Sepharose Fast Flow洗脱纯化后得到的纯化蛋白起降血脂肪功效更强。本方法具有绿豆蛋白筛选、纯化等作用，粗蛋白的提取操作简单，便于大范围推广。
- 一种小麦小分子活性肽的提取方法-201911082161.9
- 刘永清 - 江苏麦清生物科技有限公司
- 2019-11-07 - 2020-01-21 - C07K1/36
- 本发明公开了一种小麦小分子活性肽的提取方法，该方法包括以下步骤：将小麦谷朊粉用粉碎机粉成粉末，加入氢氧化钠稀溶液中调浆，调节pH＝11，温度50℃,搅拌,离心取上层清液，加入酸性物质将PH值＝4.5，离心留下蛋白质沉淀，再融于水，100℃恒温加热后，降温到37℃，加入碱性物质PH调到7.0后不停搅拌液体，加入酶水解3h后停止，加入酸性物质将PH值调到4.0，使酶失去活性，溶液放入离心机中离心，取上清液经超滤膜分离过滤，活性炭脱臭脱色，利用定向酶切特定小肽分离技术得到小麦蛋白小分子多肽物质。本发明利用蛋白质含量高的小麦谷朊粉进行分离提取小麦蛋白小分子多肽物质，资源合理化利用降低成本，制备方法便捷且小分子多肽物质提取率与质量。
- 一种纯化重组人源细胞株蛋白的方法-201911005466.X
- 董文其;李珍 - 南方医科大学
- 2019-10-22 - 2020-01-03 - C07K1/36
- 本发明提供了一种纯化重组人源细胞株蛋白(rhCygb)的方法，涉及蛋白纯化技术领域。本发明所述方法，将含有重组人源细胞株蛋白的细菌培养液依次经过除盐柱、阴离子层析柱、复合阴离子层析柱和疏水柱，再重复经过除盐柱、阴离子层析柱和复合阴离子层析柱，最后再经过凝胶过滤柱。本发明所述方法，可有效去除绝大多数带有负电荷的宿主蛋白质和核酸，使其对后续的纯化步骤的影响降到最低；去除与目的蛋白质电荷性质、疏水性相近的杂蛋白；去除绝大多数色素类物质，最后去除痕量杂蛋白及相关物质，最终使产品纯度达到95％以上。本发明所述方法所采用的层析方法容易放大至大规模生产条件下使用，满足工业生产的需要。
- 用于纯化免疫球蛋白的方法-201480078536.3
- 朴东焕;孙基桓;徐康润;崔圣民;李建术;金基镕 - 株式会社绿十字控股
- 2014-03-11 - 2019-12-31 - C07K1/36
- 本发明涉及用于纯化免疫球蛋白的方法，更具体地，涉及的用于纯化免疫球蛋白的方法包括：溶解含免疫球蛋白的血浆蛋白组分I+II+III或组分II+III；将辛酸盐加到溶液中以引起沉淀；在除去沉淀物后实施透析和浓缩；实施阴离子交换树脂和陶瓷阳离子交换树脂纯化过程，以有效地除去加入的用于灭活病毒的溶剂和去污剂；以及在保持恒定水平的盐浓度以保持免疫球蛋白的聚合物含量在低水平的同时实施洗脱。根据本发明用于制备静脉注射免疫球蛋白的方法，可省略从作为原料的组分I+II+III或组分II+III制备组分II的沉淀步骤，并且通过使用第一辛酸钠沉淀、阴离子交换色谱和阳离子交换色谱而解决了包括在利用聚乙二醇处理工艺的常规制备方法中出现的复杂的步骤和低产率的问题。此外，当使用根据本发明的纯化免疫球蛋白的方法时，可提高除去杂质和血栓性物质的效率，并可保持免疫球蛋白的聚合物含量，因此可产生质量提高的稳定的免疫球蛋白。
- 一种制备高比表面积活性多肽或蛋白的方法-201910827587.6
- 赵呈青;谷海涛;高鲁 - 杭州诺泰澳赛诺医药技术开发有限公司
- 2019-09-03 - 2019-12-17 - C07K1/36
- 本发明属药物制备领域，涉及一种制备高比表面积活性多肽或蛋白的方法，特别涉及一种控制多肽或蛋白药物表面积的纳米缓释技术，通过该技术可以实现高比表面积活性多肽或蛋白的快速高效制备，简单易操作，同时极大的提高制备效率，降低生产成本，利于工业化生产。
- 一种生物样本纯化装置-201920249541.6
- 邢金松;李浩 - 上海熙华检测技术服务有限公司
- 2019-02-27 - 2019-12-17 - C07K1/36
- 本实用新型涉及生物过滤技术领域，尤其为一种生物样本纯化装置，包括基座、第一过滤柱、第二过滤柱、第三过滤柱、密封盖、出料仓、第一过滤装置、第二过滤装置和第三过滤装置，所述基座底部中心处放置有器皿，所述基座基面固定安装有箱门，所述基座顶部固定安装有第一过滤柱，且第一过滤柱底端延伸至基座的内部，所述第一过滤柱的底部固定安装有出料仓，且出料仓底端延伸至器皿的顶部，所述出料仓底部开设有出料口，所述出料仓顶端固定安装有第一过滤装置，所述第一过滤柱顶端固定安装有第二过滤装置，本实用新型整体装置结构简单，有效避免生物样本大面积与外界空气接触，从而发生相应的物理和化学反应，影响其纯化成果，具有一定的推广作用。
- 生产肉毒杆菌毒素的方法-201480012202.6
- 金清世;宋琯荣;闵庚旼;安荣德 - 株式会社大熊
- 2014-05-07 - 2019-11-22 - C07K1/36
- 本发明涉及生产肉毒杆菌毒素的方法，更具体地涉及一种用于制备肉毒杆菌毒素的方法，该方法包括步骤：(a)用酸处理肉毒杆菌毒素生产株的培养物，以沉淀肉毒杆菌毒素；(b)向沉淀的肉毒杆菌毒素中加入缓冲液，接着用蛋白酶抑制剂和核酸酶处理，从而提取肉毒杆菌毒素；(c)用酸处理提取出的肉毒杆菌毒素以沉淀肉毒杆菌毒素并在缓冲液中溶解沉淀物；和(d)通过阴离子交换色谱纯化肉毒杆菌毒素。使用本发明的生产肉毒杆菌毒素的方法能够通过简单的过程生产出高纯度的肉毒杆菌毒素，这表明本发明的方法是非常经济有效的。相比于通过常规方法生产的肉毒杆菌毒素，通过本发明方法生产的肉毒杆菌毒素具有高纯度，并因此具有在局部作用增加的能力。因此，会导致副作用的肉毒杆菌毒素的体循减少，安全性增加。因此，本发明的肉毒杆菌毒素可用于各种目的，包括治疗神经肌肉障碍，去除皱纹，和治疗痉挛性偏瘫和脑瘫。
- 专利分类
