[发明专利]一种化学酶法制备D-谷氨酰胺的方法在审
| 申请号： | 201911112311.6 | 申请日： | 2019-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN110643670A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 陈诚;吴聪;程文莹;甘飞;杜青林;刘均忠;焦庆才 | 申请（专利权）人： | 湖北新生源生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12P41/00 | 分类号： | C12P41/00;C12P13/14;C07C231/10;C07C237/06 |
| 代理公司： | 42219 荆州市技经专利事务所 | 代理人： | 韩志刚 |
| 地址： | 434300 湖北省荆*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种化学酶法制备D‑谷氨酰胺的方法。所述方法按以下步骤进行：1、制备N‑邻苯二甲酰‑DL‑谷氨酸；2、制备N‑邻苯二甲酰‑DL‑谷氨酸酐；3、制备N‑邻苯二甲酰‑DL‑谷氨酰胺；4、制备DL‑谷氨酰胺；5、培养制备氨肽酶；6、氨肽酶拆分DL‑谷氨酰胺。本发明利用成本低廉的DL‑谷氨酸为原料，经四步简单的化学反应制备DL‑谷氨酰胺，并对工艺参数进行优化，DL‑谷氨酰胺收率由57%提高至67%；利用氨肽酶拆分DL‑谷氨酰胺，得到L‑谷氨酸和D‑谷氨酰胺，D‑谷氨酰胺达到理论收率的95%。本发明原料成本低、工艺路线简单、绿色环保，有利于工业化实施。 | ||
| 搜索关键词： | 谷氨酰胺 制备 谷氨酸 邻苯二甲酰 氨肽酶 收率 化学反应 工艺路线 绿色环保 原料成本 化学酶 优化 | ||
【主权项】：
1.一种化学酶法制备D-谷氨酰胺的方法，其特征在于：所述方法按以下步骤进行：/n（1）制备N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酸：在圆底烧瓶中加入摩尔比为1:1~1:1.2的DL-谷氨酸和邻苯二甲酸酐，在150~200℃温度下，油浴10~40分钟，自然冷却，析出晶体，干燥得到N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酸；/n（2）制备N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酸酐：将步骤（1）产生的N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酸溶于醋酸酐中回流20~60分钟，自然冷却，析出晶体，过滤，结晶用乙酸乙酯洗涤，干燥获得N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酸酐；/n（3）制备N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酰胺：将步骤（2）产生的N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酸酐溶于浓度为2~4 mol/L的氨水溶液中，在室温条件下搅拌反应20~60分钟，随后加入浓度为6mol/L的盐酸酸化至pH值为3，析出晶体，过滤，干燥获得N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酰胺；/n（4）制备DL-谷氨酰胺：将步骤（3）产生的N-邻苯二甲酰-DL-谷氨酰胺溶于浓度为0.5~2mol/L的水合肼溶液中，室温放置10~40小时，反应液用浓度为6 mol/L的盐酸酸化至pH值为3，过滤除去析出的邻苯二甲酰肼，滤液减压浓缩析出DL-谷氨酰胺，最后精制、干燥获得DL-谷氨酰胺；/n（5）培养制备氨肽酶：将具有氨肽酶活性的菌株在培养基中培养，产生高活性的氨肽酶，培养基中总碳源质量浓度为1~20 g/L，培养基中总氮源质量浓度为1~20 g/L；/n（6）氨肽酶拆分DL-谷氨酰胺：将步骤（4）产生的DL-谷氨酰胺配制成浓度为10~100 g/L的溶液，加入终浓度为5~40 g/L的氨肽酶菌体细胞或粗酶液、0.05~0.1 g/L Tween 80或Triton X-100，在20~45℃温度下，用浓度为2~3 mol/L的碳酸钠缓冲液控制pH 值为7~10，酶促转化得到L-谷氨酸和D-谷氨酰胺，用等电点结晶和离子交换树脂相结合的方法分离得到高纯度D-谷氨酰胺。/n
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