本发明涉及一种桔霉素的检测方法,特别是利用液质联用仪检测红曲中桔霉素含量的方法。它包括超声提取法对样品进行前处理,超高压液相色谱检测和质谱检测步骤,方法:采用waters BEH C18液相色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱条件,柱温为室温;用四级杆质谱检测器:正离子方式,电喷雾源,以母离子,子离子为定性定量离子,结果:本方法桔霉素的标准溶液在0.001~50μg/L之间线性良好,回归方程为y=1923.2x+270.29,R2=0.9998;样品的回收率为83.6%,检测限为0.001μg/L。结论:本方法准确度高,重复性好,适用于红曲中桔霉素的定量检测。
一种利用液质联用仪检测红曲中桔霉素含量的方法,其特征在于:包括以下步骤:(一)、样品处理过程:(1)、样品中桔霉素的提取:将试样充分混匀,称取0.2~1.0g,放于50mL离心管中;按照1∶10的体积比加入甲醇,超声提取30分钟,离心,沉淀,收集上清液;(2)、将第(1)步的沉淀物按照1∶10的体积比加入甲醇,超声提取30分钟,离心,沉淀,收集上清液;(3)、将将第(2)步的沉淀物按照1∶10的体积比加入甲醇,超声提取30分钟,离心,沉淀,收集上清液;(4)将第(1)、(2)和(3)步的上清液合并,常温减压浓缩至5mL;(5)、浓缩液离心后转移至刻度试管,读取体积备用;(6)、脱色素处理:将大孔树脂装入1.6×30cm层析柱,柱床15‑20cm,用约2倍体积的70%甲醇水溶液流过填充好的层析柱,使甲醇水溶液浸过层析柱中的大孔树脂的顶部;取1mL第(5)步的浓缩液,上柱,置于树脂柱顶部,用70%甲醇水溶液以自上而下通过树脂柱,当红色色素到达层析柱的末端时开始准确收集30mL洗脱液,洗脱液用孔径0.22μm的微孔滤膜过滤,所得过滤液用高效液相色谱‑质谱联用仪进行测定;(二)、色谱与质谱条件:(1)、所用仪器为Waters液相色谱‑质谱联用仪,色谱柱为BEH C18液相色谱柱(50*2.1mm,1.7μm);(2)、质谱条件:正离子方式,电喷雾源(ESI),质量分析器为四级杆,毛细管电压1.00kv,多反应检测(MRM)锥孔电压35V,离子源温度120℃,锥孔反吹气流量50L/hr,脱溶剂气流量500L/hr,脱溶剂温度350℃,母离子m/z=251(M+1),锥孔电压35V,子离子m/z=233和205,碰撞能量分别为27V和17V;(3)、液相条件:色谱柱:BEH C18液相色谱柱(50*2.1mm,1.7μm);(4)、流动相:A:乙腈;B:含体积0.1%甲酸的水,梯度洗脱条件,柱温为25℃,进样量10μL;(三)、标准曲线的绘制:用甲醇配制0.001μg/L、0.01μg/L、0.05μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、50μg/L的桔霉素标准溶液,在所述色谱和质谱条件下测定,记录峰面积,绘制峰面积‑浓度标准曲线;(四)、结果计算:样品中桔霉素含量X=C*V1*V2/m;式中:X——样品中桔霉素的含量,单位μg/kg;C——由标准曲线查得的洗脱液中的桔霉素浓度,单位μg/kg;V1——洗脱液体积,单位mL;V2——样品浓缩液体积,单位mL;m——样品质量,单位g。
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