[发明专利]管状蠕虫溶菌酶及其制备方法无效

专利信息
申请号: 201010515030.8 申请日: 2010-10-21
公开(公告)号: CN101974544A 公开(公告)日: 2011-02-16
发明(设计)人: 阮灵伟;鄢秀敏;徐洵;边晓芳;张梦 申请(专利权)人: 国家海洋局第三海洋研究所
主分类号: C12N15/56 分类号: C12N15/56;C12N15/10;C12N15/63;C12N9/36
代理公司: 厦门南强之路专利事务所 35200 代理人: 马应森
地址: 361005 福*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 管状 蠕虫 溶菌酶 及其 制备 方法
【说明书】:

技术领域

发明涉及一种溶菌酶,尤其是涉及一种管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶及其制备方法。深海热液区管状蠕虫Ridgeia piscesae两种溶菌酶基因lysA和lysB,特别是涉及两种溶菌酶及其制备方法。

背景技术

溶菌酶(EC 3.2.1.17)是水解酶的一种,又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,广泛分布于自然界的各种生物中,它是一种碱性球蛋白,通过水解微生物细胞壁肽聚糖中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰葡萄糖胺之间的β-1,4-糖苷键,破坏肽聚糖支架,在内部渗透压的作用下细胞胀裂开,从而引起细菌的裂解。目前,已发现的溶菌酶可分为六类:鸡蛋卵清(c)型、鹅卵清(g)型、细菌型、植物型、噬菌体型、无脊椎动物(i)型。研究发现,除了革兰氏阳性菌以外,一些溶菌酶对革兰氏阴性菌也有作用,抗原生生物、抗真菌活性也有报道;溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使病毒失活;此外,溶菌酶还参与机体内多种免疫反应,在机体正常防御和非特异性免疫中具有重要作用。因此溶菌酶具有抗菌、消炎、抗病毒、增强机体免疫力等作用,其在食品、医药、农业等领域都有着广泛的应用(1、丁亦男,聂洪峰.溶菌酶的应用进展.长春师范学院学报(自然科学版).2009,28(6):46-47)。

深海热液区是地球上典型的极端环境,具有高压、黑暗、高毒(重金属、硫等)等特点,条件极其严酷。但以管状蠕虫等为代表的生物与化能自养微生物形成了独特的共生体系,共同支撑起了这里庞大的生态系统。在这样特殊的环境里,共生体系形成了独特的遗传结构、生物功能和代谢机制,共同抵御周围的极端环境;而在代谢中形成的各种特殊活性物质,包括解毒、抗菌、抗病毒、抗癌物和酶类等,与陆地资源相比将更具特殊性,是极具潜在应用价值的资源。

发明内容

本发明的第一个目的是提供管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶基因。

本发明的第二个目的是提供管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶。

本发明的第三个目的是提供一种所述管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶的制备方法。

本发明所述管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶基因为管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶lysA基因或管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶lysB基因;

所述管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶lysA基因的分子类型为DNA;序列特征为长度:729bp,类型:核酸,链性:双链,拓扑结构:线性;其序列(记为SEQ ID No.1)如下所示:

1      ATGCGAGGGT TCCTCGTGAT AAGTTTGTCG GCGGCACTTG TCTGTCTTGG GGGGCTGGAC

61     GTCACCACTG CAGACGCGAA ATGTCTCCAG CGAGGCGGCA AGTGCCAGTA CACGTTCAAC

121    TACTGCACTG GTGCCTTCTG GTCCGGCTAC TGCTACGGGG CTAGTAACAG ACGCTGCTGC

181    ATTCCTGGCA GCAAGTCGGG AGACTCAAGT TGCATAAAGA AAGGTGGCCA CTGCATGGAC

241    GACAGGACCA ACAGTTGTGA CGGCAACTAC CAGTCAGGCT ACTGCTCCGG CAACTCTCAC

301    CGCCGATGCT GCATTGAAGG AAGCGGAGGA GGACGAAACA GCGGAGGCTC CGGAGGATTC

361    TTAGTCGAGT GCATGAACTG CATATGTGAG ATCGAGGGAT GTAGCAGGAA TTTGGGCAAG

421    TGCAGAGACG ACAAGGGATC AGACAGCTGT GGACCATTCC AAATTAAGTC ACCCTACTAC

481    ACGGACTGCT ACAAGCCGGG CTCAGATTGG CGAAGCTGTA CTAAGCAAAT GGGCTGCTCG

541    AAGATTTGCG TTGTTGCCTA CATGCGTCGC TATGGCAACC GCTGCGCCCG CATGGCTGGT

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  • 本发明涉及一种比酶活提高的木聚糖酶突变体及其编码基因与应用。木聚糖酶突变体,包括(a)、(b)或(c)所示的蛋白质;(a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质;(b)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加且具有木聚糖酶活性的由(a)衍生的蛋白质;(c)编码(a)的核苷酸序列和编码(b)的核苷酸序列经分子杂交后编码出的并且具有木聚糖酶活性氨基酸序列组成的蛋白质。本发明所述的木聚糖酶突变体比酶活提高了2.8倍,可以用于降解木聚糖底物,具有作用温度和pH范围广,具有良好的耐酸耐碱性条件能力等优点。
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  • 赵林果;葛林;石学佳;裴建军;吴涛;陈安娜 - 南京林业大学
  • 2016-10-26 - 2019-05-07 - C12N15/56
  • 土曲霉CCF 3059 α‑L‑鼠李糖苷酶突变体及其应用,包括如SEQ ID NO:2所示的D594Q基因、SEQ ID NO:3所示的D594R基因、SEQ ID NO:4所示的D594C基因、SEQ ID NO:5所示的G827K基因、SEQ ID NO:6所示的G827M基因和SEQ ID NO:7所示的G828A基因。突变酶MRha‑D594Q最适温度和原酶MRha均为65℃;但与原酶MRha相比,突变酶MRha‑D594Q在70℃和75℃时仍保持较高的酶活性;添加山梨醇能够进一步提高突变酶MRha‑D594Q的热稳定性,在70℃的半衰期提高了7.8倍。
  • 海洋微生物节杆菌YJ34产右旋糖酐酶基因及其重组工程菌-201910108956.6
  • 王淑军;刘红飞;任伟;吕明生;房耀维;刘姝 - 淮海工学院
  • 2019-02-03 - 2019-04-26 - C12N15/56
  • 本发明是一种海洋微生物节杆菌(Arthrobacter sp.)YJ34产右旋糖酐酶基因,该酶基因序列全长1923bp,以ATG为起始密码子,以TAG为终止密码子,GC碱基含量为59.23%。本发明还公开了前述右旋糖酐酶基因克隆及在大肠杆菌的高效表达得到的右旋糖酐酶基因重组工程菌。本发明属于酶学与酶工程技术领域,通过基因克隆与测序,构建重组工程菌,诱导表达,重组酶的纯化,获得纯化的重组酶。大大地提高了酶活力和酶稳定性。通过酶学性质测定该酶最适反应温度为55℃,最适作用pH为7.5。
  • 以海洋细菌为来源获取的κ-卡拉胶酶基因及重组酶制备方法-201610503827.3
  • 姚子昂;吴海歌;赵博闻;崔红利 - 大连大学
  • 2016-06-30 - 2019-04-26 - C12N15/56
  • 本发明涉及分子生物学和基因工程领域,具体来讲涉及一种以海洋细菌为来源编码获取Κ‑卡拉胶酶基因的及重组酶制备方法。本发明包括如下步骤:一、PCR法获得海洋细菌中κ‑卡拉胶酶基因的全长序列;二、以海洋细菌为来源基因κ‑卡拉胶酶基因的重组表达质粒和重组菌株的构建;三、利用重组表达菌株表达重组κ‑卡拉胶酶;四、重组酶的活性检测。本发明通过一种新的、高效、准确的途径,以海洋细菌为来源获得的κ‑卡拉胶酶基因应用于大肠杆菌工程菌株的构建,并实现具有活性重组酶的异源表达,为实现工业化生产卡拉胶酶提供基础;通过本发明中的以海洋细菌为来源获得的κ‑卡拉胶酶基因,与已知κ‑卡拉胶酶序列相似性最高为44%。
  • 一种超深渊来源溶菌酶及其制备方法-201811589246.1
  • 阮灵伟;施泓;李雪雪 - 国家海洋局第三海洋研究所
  • 2018-12-25 - 2019-04-16 - C12N15/56
  • 一种超深渊来源溶菌酶及其制备方法,涉及Eurythenes gryllus溶菌酶基因的核苷酸序列以及其所编码的氨基酸序列。通过提取Eurythenes gryllus总RNA,经RT‑PCR反转录为cDNA,通过PCR扩增获得了编码溶菌酶基因的核苷酸序列,并鉴定了溶菌酶基因EgLyz。在pET‑His载体构建了适用于原核表达的重组质粒,在大肠杆菌BL21中进行重组蛋白表达,经纯化后的蛋白纯度高,为后续生物活性分析奠定了坚实的基础。通过同源重组表达的溶菌酶,可以克服原料来源难以获取,分离纯化过程复杂繁琐、产量低等不足,为该蛋白能广泛应用于医药、食品和饲料行业等领域奠定基础。
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