[发明专利]芽胞杆菌生物被膜形成能力评估方法及应用的培养基

权利要求书

1.一种评估芽胞杆菌生物被膜形成能力的培养基，其特征在于，所述培养基包括：

第一液体培养基，所述第一液体培养基包含的溶质及浓度为，100mM磷酸三钾，34mM柠檬酸钠，1mM硫酸镁，0.1mM硫酸铵，0.3％牛肉膏，0.5％NaCl，1％胰蛋白胨，0.1％葡萄糖；在制备过程中，先将所述磷酸三钾溶入水并调整pH为7.0；所述第一液体培养基的最终pH为7.0；

第二液体培养基，所述第二液体培养基包含的溶质及浓度为，100mM磷酸三钾，34mM柠檬酸钠，1mM硫酸镁，0.1mM硫酸铵，0.3％牛肉膏，0.5％NaCl，1％细菌学蛋白胨，0.1％葡萄糖；在制备过程中，先将所述磷酸三钾溶入水并调整pH为7.0；所述第二液体培养基的最终pH为7.0。

2.根据权利要求1所述一种评估芽胞杆菌生物被膜形成能力的培养基，其特征在于，在第一液体培养基和第二液体培养基中分别加入1.5％的琼脂制成第一固体培养基和第二固体培养基。

3.一种应用权利要求1所述的培养基评估芽胞杆菌生物被膜形成能力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

将待测菌株用固体LB平板划线，挑取单菌落于液体LB培养基中，在37℃下以180rpm的速度振荡培养20小时，使菌液的OD₆₀₀值达到0.8以上；

然后用新鲜的LB培养基稀释菌液，使菌液的OD₆₀₀达到0.02，用作待测菌种液，要求待测菌种液中芽胞杆菌的浓度达到10⁶CFU/mL以上；

将灭菌后的第一液体培养基和第二液体培养基分别加入无菌平板中，将待测菌种液按照0.08％～0.1％的接种量滴加在2种培养液的表面，盖上皿盖后30℃静置培养，分别在12h、24h、 48h、72h观察薄皮的形成；

如果能够在第一液体培养基中形成完整的薄皮，但不能在第二液体培养基中形成完整薄皮的菌株，判定为属于生物被膜形成能力中等菌株；

如果在第一液体培养基和第二液体培养基中仅能形成漂浮的残缺不全的薄皮，则判定为无生物被膜形成能力或生物被膜形成能力弱的菌株；

如果能够同时在第一液体培养基和第二液体培养基中形成薄皮的，则判定为生物被膜形成能力强的菌株；

在第一液体培养基中越早形成结构稳定薄皮的菌株，则被判定为生物被膜形成能力越强。

4.一种应用权利要求1所述的培养基评估促进芽胞杆菌生物被膜形成能力的物质的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

将选取的芽胞杆菌菌株用固体LB平板划线，挑取单菌落于液体LB培养基中，在37℃下以180rpm的速度振荡培养，20小时，使菌液的OD₆₀₀值达到0.8以上；

然后用新鲜的LB培养基稀释菌液，使菌液的OD₆₀₀达到0.02，用作试验菌种液，要求试验菌种液中芽胞杆菌的浓度达到10⁶CFU/mL以上；

将灭菌后的第一液体培养基和第二液体培养基分别加入无菌平板中，将试验菌种液按照0.08％-0.1％的接种量滴加在2种培养基的表面，盖上皿盖后30℃静置培养，分别在12h、24h、 48h、72h观察薄皮的形成；

观察如果在第一液体培养基上能够在12h～24h内形成薄皮，但不能在第二液体培养基上在12h～24h内形成薄皮的或超过72h仅在第二液体培养基上形成破碎的不完整漂浮物；

则再次取灭菌后的第二液体培养基，并将待测物质加入第二液体培养基中，形成第三液体培养基；将第三液体培养基加入无菌平板中，并将试验菌种液按照0.08％-0.1％的接种量滴加在该培养基的表面，盖上皿盖后30℃静置培养，分别在12h、24h、48h、72h观察薄皮的形成；如果在第三液体培养基上能够在12h～24h内形成薄皮或超过72h能在第三液体培养基上形成完整的漂浮物，则得出待测物质具有生物被膜促进能力；反之亦然。