[发明专利]基于SPE技术的淫羊藿黄酮成分指纹图谱的建立与应用

权利要求书

1.一种基于SPE分离富集技术建立不同品种淫羊藿黄酮成分指纹图谱的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：采用SPE对不同品种淫羊藿黄酮成分进行分离和富集；

步骤2：采用HPLC方法建立淫羊藿黄酮成分对照指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述不同品种的淫羊藿包括淫羊藿，朝鲜淫羊藿，柔毛淫羊藿，箭叶淫羊藿和巫山淫羊藿中的一种或两种以上。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤1还包括对不同品种淫羊藿供试品溶液的制备。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤1中对不同品种淫羊藿供试品溶液的制备包括：称取不同品种淫羊藿样品粉末和第一提取溶剂，超声提取，再称定重量，用第一提取溶剂补足减失的重量，过滤，将所述滤液蒸干再用第二提取溶剂溶解，离心后得到的上清液，即为供试品溶液。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述第一提取溶剂和第二提取溶剂甲醇和/或乙醇水溶液；所述淫羊藿样品与第一提取溶剂的质量体积比为1g：10-200ml，所述淫羊藿样品与第二提取溶剂的质量体积比为1g：50ml-100ml；优选地，所述超声提取的时间为10-60min。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第一提取溶剂为70％(体积百分比)的甲醇水溶液，所述第二提取溶剂为50％(体积百分比)的甲醇溶液，所述淫羊藿样品与第一提取溶剂的质量体积比为1g：200ml；优选地，所述超声提取的时间为30min；进一步优选超声功率为250W；更进一步优选超声频率为40kHz。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述步骤1中采用SPE对不同品种淫羊藿黄酮成分进行分离和富集包括：采用甲醇或乙腈活化固相萃取柱，再用甲醇或乙醇平衡SPE小柱，将供试品溶液上柱，用洗脱液洗脱，所述洗脱液为甲醇溶液或乙醇溶液，最后收集洗脱液即得到富含淫羊藿黄酮成分的溶液；其中，所述洗脱次数优选为1-3次，洗脱方式优选加压或不加压。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述活化固相萃取柱采用甲醇，平衡SPE小柱采用55％的甲醇溶液，供试品溶液的量为选取1ml-3ml，优选为2ml；所述第一次洗脱采用40％-60％(体积比)甲醇2-6ml作为洗脱溶剂不加压洗脱，根据需要选择第二次洗脱情况下，所述第二次洗脱采用70-90％(体积比)甲醇溶液4-6ml作为洗脱溶剂加压洗脱；

优选的，所述第一次洗脱采用55％(体积比)甲醇4ml作为洗脱溶剂不加压洗脱，所述第二次洗脱采用80％(体积比)甲醇溶液5ml作为洗脱溶剂，加压洗脱，最后收集洗脱液即得到富含淫羊藿黄酮成分的溶液。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述步骤2中HPLC方法的色谱条件为：色谱柱为WatersACQUITY UPLC HSS T3色谱柱，所述流动相A为0～0.5％甲酸水溶液(体积百分比)，优选为0.02％-0.2％的甲酸水溶液(体积百分比)，流动相B为乙腈。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述洗脱梯度如下所述：

0-4分钟，73％→73％流动相A，27％→27％流动相B；

4-18分钟，73％→62％流动相A，27％→38％流动相B；

18-22分钟，62％→62％流动相A，38％→38％流动相B；

22-28分钟，62％→50％流动相A，38％→50％流动相B；

22-31.9分钟，50％→25％流动相A，50％→75％流动相B；

31.9-32分钟，25％→73％流动相A，75％→27％流动相B；

32-37分钟，73％→73％流动相A，27％→27％流动相B。