[发明专利]一种土人参多倍体高效诱导的方法

权利要求书

1.一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)灭菌处理：取土人参组培苗带芽点茎段切成0.8～1.2cm长，经0.1～0.3％HgCl₂灭菌10～12min，无菌水冲洗5-6次；

(2)多倍体诱导：将经过灭菌处理后的带芽点茎段，采用质量浓度为1～3mg/ml的秋水仙素培养液浸泡，进行诱导处理24～72h后，采用⁶⁰Coγ射线辐照，辐照剂量为10～15Gy，辐射剂量率为2～3Gy/min；

(3)组培幼苗：

第一阶段：将辐照后的带芽点茎段快速转至加入含质量浓度为5～10mg/L秋水仙素的1/2MS培养基中黑暗共培养3～5d，pH5.6～6.0；

第二阶段：转移至加入含质量浓度为1.0～1.5mg/L秋水仙素、0.2～0.5mg/L NAA和0.5～1.0mg/L 6-BA的1/2MS培养基中光照培养5～7d，pH5.6～6.0；

第三阶段：转移至加入含质量浓度为1.5～2.5mg/L NAA、1.5～2.0mg/L 6-BA、3.0～6.5mg/L色氨酸的MS培养基中光照培养30～40d，pH5.2～5.8，获得土人参组培幼苗；

(4)倍性鉴定：将步骤(3)获得的土人参组培幼苗，通过流式细胞仪测苗体倍性，即得到多倍体土人参。

2.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述秋水仙素的质量浓度为1.0mg/ml，诱导处理72h。

3.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述⁶⁰Coγ射线辐照剂量为12Gy，辐射剂量率为3Gy/min。

4.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(3)中，第一阶段的1/2MS培养基中的秋水仙素的质量浓度为7.5mg/L。

5.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(3)中，第二阶段的光照培养为光照6h/d和暗培养18h/d交替进行，光照强度为1200lx～1300lx，培养温度为23～25℃。

6.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(3)中，第二阶段的1/2MS培养基中秋水仙素、NAA与6-BA的质量浓度比为：1.2：0.3：0.8。

7.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(3)中，第三阶段的光照培养为光照12h/d和暗培养12h/d交替进行，光照强度为1500lx～2000lx，培养温度为26～28℃。

8.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(3)中，第三阶段的MS培养基中NAA、6-BA和色氨酸的质量浓度比为：2.0：1.7：4.8。

9.如权利要求1所述的一种土人参多倍体高效诱导的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述带芽点茎段的长度为1.0cm，带芽点茎段的芽点数量为31～33个。