[发明专利]一种肾形虫种株长期保种及快速复苏的方法

说明书

本发明属于功能物种种质资源长期保藏领域，具体涉及一种肾形虫虫株长期保种及快速复苏的方法，该方法选取0.22μm微孔滤膜作为保种介质。这种保种方法可短时间内使虫体进入包囊并附着于滤膜上，可长期稳定的对肾形虫种株进行保种，与传统的保种方法相比此法更为便捷，还具有更长的保存时间、相对容易达到的保种条件、更低廉的成本、方便运输和携带等优势。本发明也涉及从微孔滤膜复苏得到大密度的肾形虫，复苏过程简单，不受温度和时间的限制，效果显著。本发明的肾形虫种株稳定保种有效期可达半年以上，有效的解决了繁琐的保种程序、空间的限制和运输过程中虫体死亡等问题。

技术领域

本发明属于功能物种种质资源长期保藏领域，具体涉及一种肾形虫种株长期保种及快速复苏的方法利，用0.22μm微孔滤膜对肾形虫种株进行长期保存和保种后利用蒸馏水和灭菌麦粒对样品进行复苏的方法。

背景技术

现有技术报道的自由生纤毛虫的保种方法中的物种、保种方法、保种目的及效果如下表：

现有的保种方法存在的主要缺陷包括：

(1)尚未建立一种针对肾形虫的长期保种和高效复苏方法。

(2)以往采用自由生纤毛虫通用的保种方式，对仪器和条件要求较高，稳定性差，保种时间短，需要定期维护和反复复苏以保持活性；

(3)以往的保种方式对运输条件要求高，不耐受长距离和高温及低温环境。

原生动物的物种保存工作至关重要，是所有以原生动物为实验材料的科研工作的重要前提，目前已有的纤毛虫通用保种方法对肾形虫种株的保种效果并不理想，如何便捷高效的对肾形虫种株进行长期保存和迅速复苏为本发明需要解决的问题。

发明内容

鉴于现有技术存在的问题，本发明提供了利用0.22μm微孔滤膜对肾形虫种株进行长期保存和保种后利用蒸馏水和灭菌麦粒对样品进行复苏的方法。

本发明通过以下技术方案来实现：

一种肾形虫虫株长期保种方法，其他在于，包括：

(1)肾形虫的培养，挑取单个细胞进行单克隆培养，培养至对数生长期进行保种；

(2)选取0.22μm微孔滤膜作为保种介质；

(3)将0.22μm微孔滤膜置于过滤器上，将一定体积的虫液缓缓倾倒在过滤器上，待过滤完成后，取下滤膜，待干后，置于容器中保存。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤(1)包括：可于有机质含量丰富的土壤中采集土样，利用“非淹没培养法”孵化土壤中的肾形虫，96小时后在体式显微镜下利用微吸管挑取肾形虫单个细胞。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤(1)包括：挑取单个细胞后，在24孔板中每孔添加1ml蒸馏水和一颗麦粒，于20～25℃的恒温恒湿培养箱中建立单克隆培养系，72小时后将24孔板各孔的同种肾形虫混合转移至六孔板，每孔倒入10ml蒸馏水并加两颗灭菌后的麦粒，20～25℃的恒温恒湿培养箱中进行大量纯培养72小时，取对数生长期的虫体培养液进行保种。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤(2)包括：将0.22μm微孔滤膜进行裁剪至和过滤装置的型号匹配的尺寸，后将0.22μm滤膜置于超净工作台中进行紫外灭菌20min后再进行保种。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤(3)包括：取下滤膜，室温条件自然风干后，将滤膜折叠好置于离心管中，室温条件保存。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤(3)包括：将0.22μm微孔滤膜置于过滤器上，将体积为10ml的虫液缓缓倾倒在过滤器上，待过滤完成后，用镊子取下微孔滤膜，室温条件下自然风干1小时，将风干后的滤膜折叠好置于15ml离心管中，室温条件保存。