[发明专利]一种鼠抗草鱼IgT单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种鼠抗草鱼IgT单克隆抗体及其制备方法和应用，所述鼠抗草鱼IgT单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，重链可变区的CDR区包含如SEQ ID NO.3～5所示三个序列，轻链可变区的CDR区包含如SEQ ID NO.6～8所示三个序列；所述鼠抗草鱼IgT单克隆抗体可由保藏编号为CCTCC NO：C202288的杂交瘤细胞株IgT‑6H6G11分泌所得。本发明提供的鼠抗草鱼IgT单克隆抗体在还原条件下可以识别草鱼IgT重链，在非还原条件下，该单克隆抗体可以识别草鱼IgT的单体和多聚体形式，而且该单克隆抗体不会识别嵌合体IgMT1和IgMT2以及IgM。本发明为以草鱼抗体水平为指标的疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础，有利于进一步建立快速、高效、统一的疫苗评价标准。

技术领域

本发明属于单克隆抗体技术领域，具体涉及一种鼠抗草鱼IgT单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)是一类常用的免疫酶技术，其利用抗原与抗体互相结合的特异性反应对蛋白进行定量或定性检测，主要方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后利用酶标记的抗体或抗原与之孵育，加入显色剂显色，通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异，得到定性或定量的结果。通过ELISA检测鱼血清和黏液中的病原特异性的抗体水平，对于鱼类传染病的预防，鱼类疫苗免疫效果的精准评价，以及鱼类疫苗使用规程的制定具有重要意义。

草鱼(Ctenopharyngodon idella)具有肉质细嫩、个体大、肌间刺少等优点而备受消费者青睐，是我国养殖产量最大的鱼类品种。然而，随着高密度集约化养殖模式的发展，草鱼疾病频发，如败血症、出血病、肠炎病、烂鳃病和赤皮病等疾病，给我国水产养殖业造成了巨大的经济损失。由于抗生素的不断使用，细菌耐药性问题日益严峻，严重影响水产养殖业的健康可持续发展，而接种疫苗可激活鱼类免疫系统，提高机体针对特定病原的抗病力，是预防草鱼病害的重要手段，也是未来鱼类疾病防控的主流方向。但对于疫苗免疫效果的精准评价往往过程繁琐，耗时较长，且缺乏评价标准。而以鱼类免疫球蛋白(Ig)的单克隆抗体为基础，通过分析被接种疫苗的鱼类的血液和黏液中的抗体(分泌到体液中的抗原特异性Ig)滴度的变化规律来评价疫苗的免疫效果，将为建立草鱼疫苗免疫效果的评价标准体系提供有力的工具。

作为在硬骨鱼类中最新被发现的一类免疫球蛋白，IgT已被证明在鱼体免疫系统中发挥着重要的免疫功能。因此对草鱼IgT单克隆抗体的研制有助于深入了解草鱼体液免疫应答规律，并能帮助建立草鱼抗体分析与检测方法，继而建立以草鱼抗体水平为基础评价疫苗免疫效果的方法并制定疫苗的使用规程，推动以疫苗接种为核心的草鱼传染病的免疫防控技术的发展。另外，值得一提的是，草鱼有3种IgT的亚型(分别命名为IgT、IgMT1和IgMT2)，制备仅识别某个IgT亚型的单克隆抗体十分困难，目前在所有鱼类中还没有报道研制出可特异性识别某个IgT亚型的单克隆抗体。

发明内容

针对现有技术中草鱼IgT单克隆抗体缺失的问题，本发明提供了一种鼠抗草鱼IgT单克隆抗体和分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述鼠抗草鱼IgT单克隆抗体可特异性地识别草鱼IgT，而不与草鱼的其他免疫球蛋白(IgM、IgMT1、IgMT2)发生反应。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体为：

本发明的第一方面提供了一种鼠抗草鱼IgT单克隆抗体，该抗体包含重链可变区和轻链可变区；

重链可变区的CDR区包含以下三个序列：

NYRMH(CDRH1，SEQ ID NO.3)，

VITVKSDNYRARYAESVKG(CDRH2，SEQ ID NO.4)，

EGPYYGNWVAMDY(CDRH3，SEQ ID NO.5)；

轻链可变区的CDR区包含以下三个序列：