[发明专利]一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法

权利要求书

1.一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)基于UPLC-Q-TOF技术分析水荭花提取物中的化学成分；

(2)建立基于UPLC-Q-TOF技术的水荭花血浆药物化学分析方法；

(3)基于正常大鼠和MIRI大鼠的水荭花血浆药物化学筛选潜在活性化合物；

(4)潜在活性化合物的心肌保护作用验证。

2.根据权利要求1所述的一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法，其特征在于，所述步骤(1)中基于UPLC-Q-TOF技术分析水荭花提取物中的化学成分，包括以下步骤：色谱条件；质谱条件；化学成分分析。

3.根据权利要求1所述的一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法，其特征在于，所述步骤(2)中建立基于UPLC-Q-TOF技术的水荭花血浆药物化学分析方法包括以下步骤：血浆样品处理方法优化；采血时间筛选；给药剂量筛选。

4.根据权利要求3所述的一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法，其特征在于，所述血浆样品处理方法优化包括以下步骤：取同一批次血浆样品，分为4等份，各加入1％甲酸水溶液，涡混；第1份加入甲醇，涡混，超声，离心，取上清液N₂吹干，得甲醇沉淀样品；第2份加入乙腈，涡混，超声，离心，取上清液N₂吹干，得乙腈沉淀样品；第3份加入乙酸乙酯，涡混，超声，离心，萃取，合并上清液，N₂吹干，得乙酸乙酯萃取样品；第4份加入正丁醇萃取，萃取之后合并上清液，N₂吹干，得正丁醇萃取样品；4份处理好的样品，加50％甲醇复溶，涡混，超声，离心，取上清液进UPLC-Q-TOF检测。

5.根据权利要求3所述的一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法，其特征在于，所述采血时间筛选包括以下步骤：取健康SD大鼠，雄性，给药前12h进食，自由饮水；给药前称重，取空白血后按85g/Kg生药量灌胃给予水荭花提取物的1％CMC-Na混悬液，每日两次，连续给药三天，末次给药后15min、30min、45min、1h、1.5h分别经尾静脉取血，全血经离心，分离血浆，得各时间点血浆样品；取所述各时间点血浆样品，加入乙酸乙酯，涡混，超声，离心，共萃取3次，合并上清液，N₂吹干，加50％甲醇复溶，进UPLC-Q-TOF分析。

6.根据权利要求3所述的一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法，其特征在于，所述给药剂量筛选包括以下步骤：取健康SD大鼠，雄性，给药前12h进食，自由饮水；给药前称重，取空白血，随机分为3组，三个组分别按生药量40g/Kg、60g/Kg、85g/Kg分别灌胃给予水荭花提取物的1％CMC-Na混悬液，每日两次，连续给药三天，末次给药后45min经股动脉取血，全血经分离血浆，得到各组的血浆样品；所述各组的血浆样品，加入乙酸乙酯，涡混，超声，离心，合并上清液，共萃取3次，N₂吹干，加50％甲醇复溶，进UPLC-Q-TOF分析。

7.根据权利要求1所述的一种利用差异血浆药物化学筛选水荭花中活性化合物的方法，其特征在于，所述步骤(3)基于正常大鼠和MIRI大鼠的水荭花血浆药物化学筛选潜在活性化合物包括以下步骤：

S1：复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型；

S2：分别灌胃给予正常大鼠和心肌缺血再灌注损伤大鼠水荭花提取物；

S3：末次给药后收集各组大鼠的血浆；

S4：大鼠血浆经前处理后分别进UPLC-Q-TOF分析，获得血浆总离子流色谱图；

S5：对比分析生理、病理状态下血浆移行成分“量”的差异，筛选在正常生理状态和病理状态下大鼠血浆中的共有移行成分；利用化学计量学手段结合T检验，对比分析水荭花提取物在生理状态下和病理状态下大鼠的血浆移行成分“量”的差异，筛选出潜在活性化合物。