[发明专利]基于Cu+

说明书

本发明公开了基于Cusupgt;+/supgt;介导点击化学凝胶体系的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法，特点是包括以下步骤：1)将食源性致病菌适配体结合到HMSMs@SAA表面后得到信号单元HMSMs@SAAApt；2)将炔基、叠氮基偶联到PEG、PAA上得到凝胶前驱体Azide‑PEG‑Azide、PAA‑Alkyne；3)将PAA‑Alkyne溶液、Azide‑PEG‑Azide溶液、HMSMs@SAAApt分散液、CuSOsubgt;4/subgt;溶液按照体积比10:10:1:1混合即得LF‑NMR测试液，再与食源性致病菌样品混合测定未知样品中食源性致病菌浓度；优点是灵敏度和精确性高、特异性强且操作简单快速。

技术领域

本发明涉及一种食源性致病菌的检测方法，尤其是涉及一种基于Cu⁺介导点击化学凝胶体系的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法。

背景技术

食源性致病菌是指可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌。常见的食源性致病菌有：副溶血性弧菌、创伤弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等。目前的检测技术主要包括：(1)传统的微生物计数法，如琼脂平板和肉汤稀释测定法、抑菌圈法、膜过滤法等。(2)分子生物学检测，包括聚合酶链式反应(PCR)、聚合酶螺旋反应(PSR)、环介导等温扩增(LAMP)、核酸序列扩增(NASBA)、基因芯片等。(3)免疫学检测，包括电化学发光分析(ECL)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、荧光免疫测定(FIA)、电化学阻抗谱(EIS)，表面增强拉曼散射(SERS)、比色法等。上述方法具有特异性强、灵敏度较高等优势，但由于通常需要熟练的技术人员、复杂的样品前处理步骤以及昂贵的仪器，对于经济欠发达地区和突发的大规模疫情地区，难以满足现场实时快速和便携化检测的要求。因此，开发一种能够实现常见致病菌高灵敏现场即时检测的方法尤为重要。

核磁共振弛豫测量法利用低磁场(＜1.0T)时域核磁共振来测量水、食品样品的弛豫过程，其主要的信号源是水分子。弛豫时间与水分子的流动性以及动力学有关，而水分子的流动性以及动力学与周围的环境息息相关。因此，以水分子作为信号源的核磁共振弛豫检测方法主要通过改变周围环境来影响水分子的状态，从而达到检测目标物的目的。其中，最为常用的方法是通过磁弛豫开关传感器(MRS)来实现信号的转变。MRS具有样品预处理简单、响应快、灵敏度高、背景信号低等优点，目前已应用于生物大分子、致病菌、农药残留以及重金属的检测。检测原理是通过目标物介导的磁性纳米颗粒聚合和分散状态或数量影响体系内部水分子横向弛豫时间(T₂)的变化实现对目标物定性定量的分析，但是此类方法存在局限性，即由磁性标签粒径分布宽、不可控的聚集和顺磁性离子的低饱和磁化强度等带来的不稳定性与低灵敏度。因此，开发通过直接改变水分子本身状态影响其弛豫时间进行分析的无磁性弛豫开关传感器势在必行。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏度和精确性高、特异性强且操作简单快速的基于Cu⁺介导点击化学凝胶体系的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于Cu⁺介导点击化学凝胶体系的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法，本方法不以诊断或治疗为目的，包括以下步骤：

(1)信号单元HMSMs@SAAApt的合成

A.向氨基化介孔中空二氧化硅小球(HMSMs)中负载抗坏血酸钠(SAA)，得到HMSMs@SAA；

B.将食源性致病菌适配体(Apt)通过静电引力作用结合到HMSMs@SAA表面后封住所有介孔，得到信号单元HMSMs@SAAApt；

(2)LF-NMR(低场核磁共振)测试液的制备