[发明专利]单克隆抗体、杂交瘤、测定PTX3蛋白质的改进方法以及用于上述测定的试剂盒

摘要

一种用于测定生物流体样品中PTX3蛋白质水平的方法；一种能够产生大鼠抗PTX3单克隆抗体的杂交瘤，其中上述的杂交瘤选自MNB10和Pen－3；从杂交瘤MNB10和Pen－3产生的单克隆抗体中筛选得到的特异的抗PTX3大鼠单克隆抗体；测定生物流体中PTX3蛋白质水平的试剂盒，其中所述试剂盒包含大鼠抗PTX3单克隆抗体。

主权项

1.一种测定生物流体样品中的PTX3蛋白质水平的方法，包含以下步骤：i)将96-孔ELISA平板用100μl含有大鼠单克隆抗体的溶液包被，并在4℃温育一夜；ii)然后将该平板用缓冲溶液和能够封闭非特异性结合位点的溶液进行清洗；iii)在环境温度下温育2小时后，将该平板再度用清洗缓冲液清洗；iv)将稀释于合适培养基中的50μl标准重组人PTX3或待测生物流体样品加入到每个孔中，一式两份，并将该平板在37℃温育2小时；v)将平板用清洗缓冲液反复清洗，然后再将100μl的25ng/ml生物素化抗PTX3兔IgG的清洗缓冲液加入到每个孔中；vi)将平板在37℃温育1小时，然后用清洗缓冲液反复清洗；vii)在每个孔中加入100μl稀释的链霉亲和素-过氧化物酶，并将平板在环境温度下温育1小时；viii)将平板用清洗缓冲液反复清洗后，在每个孔中加入100μl的生色底物；ix)将平板在环境温度下短暂温育，加入终止溶液，并使用自动读数器在405nm为平板读数；其中的改进之处在于：——在步骤(i)中使用的大鼠单克隆抗体是从杂交瘤MNB10(登录号No.ABC/PD04001)或杂交瘤Pen-3(登录号No.ABC/PD01004)中获得的抗体；——在步骤(vii)中使用的链霉亲和素-过氧化物酶以1∶8000稀释；并且——在步骤(viii)中使用的生色底物是四甲基联苯胺(TMB)。