[发明专利]一种甘蔗转基因瞬时表达叶片受体材料的制备方法有效
申请号: | 201210392005.4 | 申请日: | 2012-10-16 |
公开(公告)号: | CN102911929A | 公开(公告)日: | 2013-02-06 |
发明(设计)人: | 高三基;米尔科夫艾瑞克;陈如凯;林艺华;付为林;傅华英;陈永武 | 申请(专利权)人: | 福建农林大学 |
主分类号: | C12N15/09 | 分类号: | C12N15/09;C12N15/87;C12N5/04 |
代理公司: | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人: | 蔡学俊 |
地址: | 350002 福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | 本发明涉及一种甘蔗转基因瞬时表达叶片受体材料的制备方法,包括甘蔗叶片外植体田间采样、甘蔗叶片外植体表面消毒、甘蔗叶片外植体制备和甘蔗叶片外植体预培养。本发明的方法取代了传统的甘蔗愈伤组织为外植体,建立了快速、高效、简便的甘蔗叶片受体材料制备技术,可广泛应用于高通量的外源基因表达、启动子活性分析、基因沉默等方面的甘蔗转基因瞬时表达研究。 | ||
搜索关键词: | 一种 甘蔗 转基因 瞬时 表达 叶片 受体 材料 制备 方法 | ||
【主权项】:
1.一种甘蔗转基因瞬时表达叶片受体材料的制备方法,其特征在于操作步骤如下:(1)甘蔗叶片外植体田间采样:取生长正常且无病虫害的甘蔗植株梢部,去除老叶和生长出来的上部叶片; (2)甘蔗叶片外植体表面消毒:去除梢部叶片和蔗茎,留20-30厘米长的叶片组织,用体积比75%酒精溶液消毒后,移入无菌的超净工作台; (3)甘蔗叶片外植体制备:剥去-1和-2叶及以外的叶片,取-3和-4嫩叶,去除中脉后将基部幼嫩叶片切成2厘米×2厘米的小方块,平铺于的MS0.6固体培养基上,上表面朝下;所述MS0.6固体培养基为:改良MS+0.5 g/L水解酪蛋白+0.6 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉;所述改良MS培养基的配方如表1所示; 表1 改良MS培养基配方(4)甘蔗叶片外植体预培养:小方块幼嫩叶片在28 ℃条件下暗培养3-5天后,即可作为甘蔗转基因瞬时表达叶片受体材料。
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