[发明专利]鸡血中抗菌肽的提取方法在审
| 申请号： | 201210553956.5 | 申请日： | 2012-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN103880939A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 张述智;夏伟;朱绍辉;张浩;王晓丽;徐权汗;李之详;许团辉 | 申请（专利权）人： | 青岛中仁药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/465 | 分类号： | C07K14/465;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16 |
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| 地址： | 266300 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鸡血中抗菌肽的提取方法，它包括以下具体步骤：（1）鸡血采集；（2）萃取；（3）除酸、浓缩；（4）抗菌肽的分离；（5）抗菌肽的纯化与浓缩。本提取方法简单易懂，提取的抗菌肽对革兰氏阴性及阳性细菌均有高效广谱的杀伤作用，纯化产物的抑菌效果高于6000单位青霉素的抑菌效果，粗提物和纯化物对大肠杆菌均有着较强的抑菌效果。 | ||
| 搜索关键词： | 鸡血中 抗菌 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种鸡血中抗菌肽的提取方法，其特征在于：它包括如下具体步骤：一、鸡血采集：从屠宰场采取新鲜鸡血2‑3L,使用5%柠檬酸钠抗凝；二、萃取：将新鲜鸡血放置37℃温箱静置1‑2h，取上清按照1：4的比例加入0.84%氯化铵溶液，混匀静置3min，常温400r/min离心10min，弃上清按比例加入氯化铵溶液混匀静置3min，再次500r/min离心10min；弃上清，使沉淀与少量4℃的生理盐水短时间混合，再用200ml的4℃的10%冰醋酸使沉淀悬浮，充分混匀，倒入50ml烧杯，超声波处理50次，然后溶液使用磁力搅拌器混匀搅动于4℃下萃取一夜；次日，将萃取的溶液取出15000r/min离心30min，取上清4℃下保存，沉淀再次混悬于冷的10%醋酸中，充分混匀，混匀搅动于4℃下萃取一夜；第三天将萃取的溶液取出15000r/min离心30min，最后将溶液4℃下保存；三、除酸、浓缩：合并所保存的溶液,将溶液注入透析袋,扎紧袋口,然后将其放入烧杯,再向烧杯中倒入蒸馏水,蒸馏水液面要超过透析袋，4℃下透析除酸，每12h换水一次，直至透析袋外蒸馏水pH大于6，将透析袋放入瓷盘中，撒上聚乙二醇6000,透析浓缩约3‑4h后即可将透析袋取出，将浓缩的溶液取出低温冻干，转移至青霉素小瓶中,密封‑20℃保存；四、抗菌肽的分离：将冻干样品用0.5%甲醇溶解,再上样于层析柱葡聚糖凝胶SephadexG25，同时打开柱的下端出口，注意控制流速为1mL/min，5mL/管，用部分收集器收集洗脱液，5mL/管，收集的溶液用紫外分光光度计测其在280nm处的吸收值，将在280nm处有吸收的溶液分装于青霉素瓶中，再在低温冻干机中冻干，‑80℃保存，取各瓶冻干保存的样品各20mg，分别溶于灭菌双蒸水中,无菌条件下用微孔滤膜过滤样品,将药敏纸片浸泡于过滤后的样品中,浸泡过夜后,用平皿纸片法初筛，收集具有抗菌活性的组分，置于5℃保存；五、抗菌肽的纯化与浓缩：使用超滤装置进行超滤，膜包选用截流分子量为20kD，洗脱液选用0.5%甲醇溶液，滤出液既为所要获得的溶液。
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- 马美湖;单媛媛;黄茜;高菲 - 华中农业大学
- 2013-09-09 - 2013-12-11 - C07K14/465
- 本发明公开了一种卵黏蛋白复合增溶剂，它由极性脂肪族氨基酸或其盐与多元醇组成，所述极性脂肪族氨基酸或其盐与多元醇的重量比为5~10∶1，所述极性脂肪族氨基酸为精氨酸和谷氨酸中的一种或混合物。本发明还公开了一种卵黏蛋白增溶方法，它是将卵黏蛋白与卵黏蛋白复合增溶剂按1∶2~8的重量比溶解于水中制成溶液，使溶液中的极性脂肪族氨基酸或其盐的浓度为100~400mmol/L而实现的。本发明能有效提高卵黏蛋白的溶解度，同时增强了卵黏蛋白的抗病毒作用，适合在食品和医药领域应用。
- 一种水溶性禽蛋膜活性肽生产方法-201310165353.2
- 周长芳;黄平;吴松兰 - 江苏福旦生物医药有限公司
- 2013-05-08 - 2013-09-04 - C07K14/465
- 本发明涉及一种水溶性禽蛋膜活性肽生产方法，包括在超声处理下对包括蛋壳膜的禽蛋壳进行水解的步骤；其中所述超声处理的频率为60-130KHz，水解液为pH＝12-14之间的强碱溶液，水解温度为80-120℃，水解时间为60-120分钟。本发明的技术方案无需将蛋壳和蛋膜分离，只需在特定频率的超声波辅助和碱性条件下进行快速的水解，并对水解液进行过滤、浓缩和纯化，得到水溶性的禽蛋膜活性肽。本发明的水解方法制备得到的活性肽，不仅稳定性好、安全性高，而且分子量较低，活性更高，特别适用于疮口愈合，此外还可以作为保健食品、化妆品等领域的高端新产品。
- 从鸡蛋清中提取卵巨球蛋白的方法-201310073453.2
- 马美湖;耿放;黄茜 - 华中农业大学
- 2013-03-08 - 2013-06-26 - C07K14/465
- 本发明公开了一种从鸡蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，该方法包括鸡蛋清溶液的制备、聚乙二醇分离、沉淀溶解与处理、凝胶过滤层析纯化四个步骤。本发明解决了卵巨球蛋白分离纯化操作复杂、周期长、得率低等问题，建立了一种简单、快速和高效的卵巨球蛋白提取方法，所得卵巨球蛋白纯度达到95.98%，在保持高纯度的同时，回收率大幅提高，达到61.4%，该方法整个过程仅需10~12小时即可完成，大大简化了操作，降低了成本，提高了效率。
- 一种利用动物毛发碱法水解制备羽毛蛋白的方法-201110403055.3
- 韩冰;刘志杰;惠志涛;冯志明 - 南京工程学院
- 2011-12-07 - 2013-06-12 - C07K14/465
- 本发明属于化工领域，一种利用动物毛发碱法水解制备羽毛蛋白的新方法。在本专利中采用强碱性物质分解角蛋白，能使它水解成各种游离的氮基酸。利用废旧羽毛∶碱∶水按照100∶10～300：100～500的质量比反应。废旧羽毛指废旧鸡毛、鸭毛、鹅毛、各种禽类及动物的毛发，碱指的是氢氧化钡、氢氧化钙、氢氧化锌等，在80-180度下水解0.5～5小时，然后降温至50度下，加入碳酸铵，碳酸氢铵等，过滤除去沉淀，后浓缩母液即可得到高纯的羽毛蛋白。
- 禽蛋中卵黄高磷蛋白的提取及纯化方法-201210475785.9
- 吴子健;王亮;吕瑜峰;李建颖;孙佩佩 - 天津商业大学
- 2012-11-21 - 2013-02-20 - C07K14/465
- 本发明公开了一种禽蛋中卵黄高磷蛋白的提取及纯化方法，而提供一种可直接在食品医药等纯度要求较高的行业应用，所得产品纯度高，操作简单，易于产业化生产的禽蛋中卵黄高磷蛋白的提取及纯化方法。包括如下步骤：取禽蛋中的卵黄去除水溶性物质，采用乙醇脱脂后，用高浓度盐溶液浸提得到卵黄高磷蛋白粗品；利用阴离子交换层析法纯化上述卵黄高磷蛋白粗品并除盐，得到高纯度的卵黄高磷蛋白。本发明的方法采用阴离子交换树脂纯化卵黄高磷蛋白，大幅提高了卵黄高磷蛋白的纯度，而且其回收率也较高。本工艺各环节操作简单，设备成本低廉，易于实现产业化生产，所得卵黄高磷蛋白可直接用于食品医药行业。
- 从鸡蛋清中提取核黄素结合蛋白的方法-201210260866.7
- 马美湖;武小芬;邱宁;黄西 - 华中农业大学
- 2012-07-26 - 2012-11-28 - C07K14/465
- 本发明公开了一种从鸡蛋清中提取核黄素结合蛋白的方法，通过硫酸铵分级沉淀蛋白质，然后采用DEAE-Toyopearl650M阴离子交换层析进行分离。本发明获得的核黄素结合蛋白纯度高，回收率较好，通过分级沉淀，能去除蛋清中几乎所有的卵黏蛋白及部分卵白蛋白和卵转铁蛋白，降低了蛋清粘度，从而使后续的阴离子交换层析仅需采用一种层析填料即可获得高纯度的核黄素结合蛋白，无需更换填料，提高了填料的利用率，同时还简化了操作步骤，缩短了提取时间。
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