[发明专利]成人睾丸支持细胞-胰岛复合物及其制备方法

摘要

本发明为成人胰岛-睾丸支持细胞复合物及其制备方法，解决了目前分离纯化的胰岛在移植后引缺血缺氧以及免疫排斥反应的而丧失功能，导致移植物失功，影响胰岛移植效果的难题。制备方法：一、采用半自动灌注及连续密度梯度法分离纯化成人胰岛。二、采用两步消化法分离纯化成人睾丸支持细胞。三、采用特定的共培养方法构建胰岛-睾丸支持细胞复合物。本发明的优点是将胰岛细胞和睾丸支持细胞偶联成复合物作为移植物，使睾丸支持细胞附着于胰岛表面，改善胰岛的营养状况，抑制排斥反应，提高胰岛其的存活率，具有操作简便、成功率高的优点。

主权项

成人睾丸支持细胞‑胰岛复合物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤，睾丸支持细胞的分离纯化：采用两步消化法分离纯化睾丸支持细胞；成人胰岛的分离纯化：采用半自动灌注过滤法用1.5 g/L的胶原酶Ⅴ，消化胰腺，采用自动细胞淘洗仪（型号：Cobe2991），通过连续密度梯度离心的方法进行胰岛的纯化，分离和纯化的胰岛悬浮于含100 ml/L胎牛血清的RPMI‑1640培养基，于37℃、50 ml/L CO2 培养箱中培养；睾丸支持细胞‑胰岛复合物的建立：首先将睾丸支持细胞消化，采用PKH‑67对其进行标记；红色荧光细胞表面交联剂（PKH‑26）标记的睾丸支持细胞与胰岛混合成细胞悬液0.5毫升，置于细胞细胞培养管培养2小时，随后转移肝素处理的低吸附培养皿中，加入含100 g/L 胎牛血清的RPMI1640培养基3 ml培养，使睾丸支持细胞附着于胰岛表面。