[发明专利]一种人源annexin A2的生产方法及其应用

摘要

本发明涉及基因工程领域，尤其是指一种人源annexin A2（膜联蛋白A2)的生产纯化方法及其应用，具体阐述为膜联蛋白A2（annexin A2）cDNA的获得与扩增，表达annexin A2的菌种的筛选扩建，以及annexin A2蛋白的纯化、保存，最终以生物制剂的形式服务于医疗领域。本发明还描述了膜联蛋白A2在制备人annexin A2蛋白生物制剂中的应用。本发明提出诱导膜联蛋白A2表达的最佳温度、时间及IPTG浓度。还包括提出纯化膜联蛋白A2的最佳咪唑浓度，以达到大规模纯化生产用于医疗领域的目的。

主权项

一种人源annexin A2的生产方法，其特征在于：包括如下步骤：1)用Trizol RNA提取试剂盒提取人脑微血管内皮细胞（HBMEC）的总RNA，提取的总RNA用无RNAase的DEPC水溶解；将提取的细胞总RNA，用下游引物5’‑CAGGACCTTATCTCGCGTCC‑3’进行反转录，反转录获得的cDNA进行PCR扩增；2)将核苷酸序列插入原核表达载体pET‑21b(+)中，构建重组载体，并将重组载体转化到宿主细菌E.coli.BL21(DE3)中，做质粒转化处理，并抽提质粒；3)质粒转化到宿主细菌E.coli.DH5α中，含AMP50μg/mL的LB培养基于37℃下培养3h后，筛选阳性克隆添加终浓度为0.75‑1.25mmol/L的IPTG于25‑37℃下诱导3‑6h，得到annexin A2。