[发明专利]一种微生物发酵生产利普司他汀的方法及培养基有效
| 申请号： | 201410023133.0 | 申请日： | 2014-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN103820510A | 公开（公告）日： | 2014-05-28 |
| 发明（设计）人： | 朱廷恒;王凌斐;吴涛;汪琨;崔志峰 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学;余姚市浙工大技术转移中心 |
| 主分类号： | C12P17/02 | 分类号： | C12P17/02;C12R1/465 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种微生物发酵生产利普司他汀的方法，以及所用的发酵培养基。所述方法包括：将毒三素链霉菌（Streptomyces toxytricini）接种至发酵培养基，培养基中添加Mg2+、Co2+和Zn2+的终浓度分别为10～15mmol/L、0.5～2.0mmol/L和0.1～0.5mmol/L，在28℃、220r/min下进行发酵培养，并在发酵培养第4天添加亮氨酸至其终浓度为40～50mmol/L、第6天添加正辛酸至其终浓度为30～40mmol/L，总发酵培养时间为150～180h，发酵结束后，于发酵液中获得所述利普司他汀；本发明对影响利普司他汀发酵合成的前体物以及金属离子的添加组合进行了优化，找到了最佳的前体物和金属离子的组合，显著提高了利普司他汀的产量，应用于工业化生产利普司他汀可以显著提高效价，降低成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 微生物 发酵 生产 利普司 方法 培养基 | ||
【主权项】：
一种微生物发酵生产利普司他汀的方法，所述方法包括：将毒三素链霉菌（Streptomyces toxytricini）接种至发酵培养基，在28℃、220r/min下进行发酵培养，并在发酵培养第4天添加亮氨酸至其终浓度为40～50mmol/L、第6天添加正辛酸至其终浓度为30～40mmol/L，总发酵培养时间为150～180h，发酵结束后，于发酵液中获得所述利普司他汀；所述发酵培养基组成如下：黄豆饼粉30～40g/L，玉米蛋白粉5～10g/L，葵花油80～120g/L，大豆卵磷脂20～30g/L，甘油20～30g/L，吐温‑800.01～0.1g/L，碳酸钙0.1～1.0g/L，维生素E0.01～0.5g/L，维生素C0.05～0.5g/L，MgSO410～15mmol/L，CoSO4·7H2O0.5～2.0mmol/L，ZnSO4·7H2O0.1～0.5mmol/L，溶剂为水，pH7.0～7.5。
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- 一种用于红豆杉细胞高密度培养的培养基-201510973465.X
- 夏雪城;马超 - 天津市博爱生物药业有限公司
- 2015-12-18 - 2016-03-23 - C12P17/02
- 本发明提供了一种用于红豆杉细胞高密度培养的培养基，该培养基以硝酸钠和磷酸氢二钾分别作为氮源和磷源，并添加了一定的氯化钙，在此基础上意外的发现通过添加特定种类及成分的中药材有助于提升细胞培养密度。基于以上有益的发现，本发明通过实验手段优选了佛手参、扶桑花、古羊藤、桂皮油、含羞草、山楂、胡荽子、虎头蕉、桦菌芝等原本用于人类疾病治疗的中药材成分，所得培养基意外获得了突出的培养效果，使得红豆杉细胞的培养密度得到显著提升，同时其生长速度更快。本发明以创新性的技术手段获得优越的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有良好的应用前景。
- 一种红豆杉细胞培养基-201510969068.5
- 夏雪城;黄友法 - 天津市博爱生物药业有限公司
- 2015-12-18 - 2016-03-16 - C12P17/02
- 本发明提供了一种红豆杉细胞培养基，该培养基以硝酸钠和磷酸氢二钾分别作为氮源和磷源，并添加了一定的氯化钙，在此基础上意外的发现通过添加特定种类及成分的中药材有助于提升细胞培养密度。基于以上有益的发现，本发明通过实验手段优选了黄蜀葵、火绒草、鸡眼草、剪刀草、腊梅花、苦木、辣蓼草、江南卷柏、瓜子金等原本用于人类疾病治疗的中药材成分，所得培养基意外获得了突出的培养效果，使得红豆杉细胞的培养密度得到显著提升，同时其生长速度更快。本发明以创新性的技术手段获得优越的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有良好的应用前景。
- 一种诱导红豆杉细胞生产多烯紫杉醇半合成前体的培养基添加剂-201510964058.2
- 夏雪城;马丹 - 天津市博爱生物药业有限公司
- 2015-12-18 - 2016-03-09 - C12P17/02
- 本发明提供了一种诱导红豆杉细胞生产多烯紫杉醇半合成前体的培养基添加剂，该添加剂包括噻重氮苯基脲、赤霉素、聚乙烯比咯烷酮、槲皮素、蛋白胨、酵母粉、黄芩、苦楝皮、莨菪子、独定子等成分。本发明通过在培养基中添加诱导子的方式干涉红豆杉细胞自身代谢模式，从而定向诱导红豆杉细胞分泌多烯紫杉醇半合成前体——10-去乙酰浆果赤霉素Ⅲ。实验发现，在细胞培养液中添加本发明添加剂后，红豆杉细胞对10-去乙酰浆果赤霉素Ⅲ的分泌量显著提升，同时能够在一定程度增进细胞培养密度。本发明技术思路清晰，技术方案合理，具有良好的规模化应用前景。
- 一种用于规模化生产紫杉醇的红豆杉细胞培养基-201510960018.0
- 马丹;夏津城 - 天津市博爱生物药业有限公司
- 2015-12-18 - 2016-03-02 - C12P17/02
- 本发明提供了一种用于规模化生产紫杉醇的红豆杉细胞培养基，该培养基以传统自养培养基提供氮源和磷源，并添加了一定的钙离子，在此基础上意外的发现通过添加特定种类及成分的中药材有助于促进紫杉醇的产率。基于以上有益的发现，本发明通过实验手段优选了虫白蜡、八月札、山药、雌黄、凤眼草、杜仲、地黄、蜂蜡、麦冬等原本用于人类疾病治疗的中药材成分，所得培养基意外获得了突出的培养效果，使得红豆杉细胞的紫杉醇产率得到显著提升，同时其生产周期更短。本发明以创新性的技术手段获得优越的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有良好的应用前景。
- 一种诱导红豆杉细胞生产10-去乙酰浆果赤霉素Ⅲ的培养基添加剂-201510960016.1
- 夏雪城;夏爽 - 天津市博爱生物药业有限公司
- 2015-12-18 - 2016-03-02 - C12P17/02
- 本发明提供了一种诱导红豆杉细胞生产10-去乙酰浆果赤霉素Ⅲ的培养基添加剂，该添加剂包括钼酸钠、秋水仙素、组氨酸、芹菜素、蛋白胨、酵母粉、连翘、鸡骨草、扁豆衣、景天三七等成分。本发明通过在培养基中添加诱导子的方式干涉红豆杉细胞自身代谢模式，从而定向诱导红豆杉细胞分泌多烯紫杉醇半合成前体——10-去乙酰浆果赤霉素Ⅲ。实验发现，在细胞培养液中添加本发明添加剂后，红豆杉细胞对10-去乙酰浆果赤霉素Ⅲ的分泌量显著提升，同时能够在一定程度增进细胞培养密度。本发明技术思路清晰，技术方案合理，具有良好的规模化应用前景。
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