[发明专利]L‑鸟氨酸酶法转化制备方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种L‑鸟氨酸酶法转化制备方法。该制备方法采用含有精氨酸的料液或精氨酸粗品或精氨酸盐粗品为底物配制酶转化液，加入具有精氨酸酶活性的菌体细胞或酶粗提液，在25～55℃、pH 7～11条件下进行酶促反应，利用等电点结晶和离子交换相结合的方法分离制备转化产物L‑鸟氨酸盐酸盐。该方法以廉价的L‑精氨酸料液为底物酶法合成了附加值较高的L‑鸟氨酸盐酸盐，具有原料来源广，酶促转化效率高，操作简便，生产成本低等优点。

主权项

一种L‑鸟氨酸酶法转化制备方法，其特征是该方法由以下步骤构成：(1)将粪肠球菌ATCC 8043在如下1000mL质量体积比为g/mL的培养基中培养：玉米浆2.0％，蛋白质水解物0.5％，牛肉膏1％，麦芽糖1.0％，乳糖0.5％，NaCl 0.5％，磷酸二氢钾0.5％，七水硫酸镁0.03％，pH 7.2，37℃振荡培养16h，4000r/min离心15min得湿菌体18g；(2)将湿菌体加入到1000mL转化液中，转化液为含150g/L L‑精氨酸的精氨酸发酵液，pH 9.0，再加入1.0g/L TritonX‑100，40℃酶促反应18h，反应结束后取样检测转化液中L‑鸟氨酸质量浓度为112.7g/L，对L‑精氨酸摩尔转化率为99％；(3)将转化液离心去除菌体，上清液用6mol/L盐酸中和至pH 6.0，升温至80℃，活性炭脱色、真空抽滤，滤液浓缩至有少量晶体析出，向浓缩液中加入3倍体积的无水乙醇，冷却结晶，抽滤、用少量乙醇洗涤晶体，干燥后得L‑鸟氨酸盐酸盐119.4g，收率83％，比旋光c＝4，6mol/L盐酸；(4)结晶母液回收乙醇后用蒸馏水适当稀释上阳离子交换柱，L‑鸟氨酸被吸附，用1mol/L盐酸解吸，流出液用氢氧化钠中和至pH 6.0，活性炭脱色、真空浓缩至有晶体析出，加入3倍体积的无水乙醇，冷却结晶，抽滤、用少量乙醇洗涤晶体，干燥后得L‑鸟氨酸盐酸盐8.6g。