[发明专利]一种测定丹知青娥片中指标成分含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定丹知青娥片中指标成分含量的方法，增加了补骨脂苷、异补骨脂苷作为指标成分，另外，在构建含量测定分析方法时发明人采用液相色谱等度洗脱方法单独测定每种指标成分的含量，分别建立了补骨脂素和异补骨脂素、补骨脂苷和异补骨脂苷、丹酚酸B、芒果苷多个含量测定的方法，借助于特定的提取条件，能够实现特定指标成分的高效富集，不仅可以弥补现有标准的不足，能够更好、更全面地控制和反映丹知青娥片的内在质量，保证丹知青娥片临床用药的安全性和有效性，而且具有简单快速、专属性强、重现性好等优点。

主权项

一种测定丹知青娥片中指标成分含量的方法，其特征在于，所述方法单独测定每种指标成分，所述指标成分包括补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂苷、异补骨脂苷、丹酚酸B和芒果苷，所述方法包括：(1)获得每种指标成分供试品溶液的高效液相色谱图对于补骨脂素和异补骨脂素：称取质量为M1的丹知青娥片粉末，精密称定，用体积为V1的、体积分数90～100％的甲醇对指标成分补骨脂素和异补骨脂素进行提取，超声处理10‑20分钟，离心取上清液作为指标成分补骨脂素和异补骨脂素的供试品溶液，其中，补骨脂素的浓度以C补骨脂素表示，异补骨脂素的浓度以C异补骨脂素表示，M1与V1的比为0.01‑0.05g/mL；对于补骨脂苷和异补骨脂苷：称取质量为M2的丹知青娥片粉末，精密称定，用体积为V2的、体积分数65～85％的甲醇对指标成分补骨脂苷和异补骨脂苷进行提取，超声处理15‑30分钟，离心取上清液作为指标成分补骨脂苷和异补骨脂苷的供试品溶液，其中，补骨脂苷的浓度以C补骨脂苷表示，异补骨脂苷的浓度以C异补骨脂苷表示，M2与V2的比为0.01‑0.05g/mL；对于丹酚酸B：称取质量为M3的丹知青娥片粉末，精密称定，用体积为V3的、体积分数65～85％的甲醇对指标成分丹酚酸B进行提取，超声处理10‑20分钟，离心取上清液作为指标成分丹酚酸B的供试品溶液，其中，丹酚酸B的浓度以C丹酚酸B表示，M3与V3的比为0.002‑0.02g/mL；对于芒果苷：称取质量为M4的丹知青娥片粉末，精密称定，用体积为V4的、体积分数40～65％的甲醇对指标成分芒果苷进行提取，超声处理10‑20分钟，离心取上清液作为指标成分芒果苷的供试品溶液，其中，芒果苷的浓度以C芒果苷表示，M4与V4的比为0.004‑0.02g/mL；在每种指标成分所对应的预设色谱条件下，将每种指标成分的供试品溶液分别注入高效液相色谱仪中，获得每种指标成分供试品溶液的高效液相色谱图；(2)建立每种指标成分标准品的标准曲线分别精密称定补骨脂素和异补骨脂素标准品，用体积分数90～100％的甲醇溶解，分别制成具有已知浓度的补骨脂素和异补骨脂素标准品储备液，用体积分数90～100％的甲醇制备成至少3个具有不同已知浓度的补骨脂素和异补骨脂素混合标准品溶液；其中，补骨脂素和异补骨脂素浓度范围均为2‑250μg/mL；分别精密称定补骨脂苷和异补骨脂苷标准品，用体积分数65～85％的甲醇溶解，分别制成具有已知浓度的补骨脂苷和异补骨脂苷标准品储备液，用体积分数65～85％的甲醇制备成至少3个具有不同已知浓度的补骨脂苷和异补骨脂苷混合标准品溶液；其中，补骨脂苷和异补骨脂苷浓度范围均为2‑150μg/mL；精密称定丹酚酸B标准品，用体积分数65～85％的甲醇溶解，制成具有已知浓度的丹酚酸B标准品储备液，用体积分数65～85％的甲醇将丹酚酸B标准品储备液稀释成至少3个具有不同已知浓度的丹酚酸B标准品溶液；其中，丹酚酸B浓度范围为5‑600μg/mL；精密称定芒果苷标准品，用体积分数40～65％的甲醇溶解，制成具有已知浓度的芒果苷标准品储备液，用体积分数40～65％的甲醇将芒果苷标准品储备液稀释成至少3个具有不同已知浓度的芒果苷标准品溶液；其中，芒果苷浓度范围为2‑250μg/mL；在(1)中的每种指标成分所对应的预设色谱条件下，将该种指标成分的各浓度标准品溶液分别注入高效液相色谱仪中，获得该种指标成分的各浓度标准品溶液的高效液相色谱图；以各标准品溶液的高效液相色谱图中各指标成分的色谱峰峰面积为纵坐标或横坐标，以各指标成分的浓度为横坐标或纵坐标，分别建立各指标成分的标准曲线；(3)确定供试品中每种指标成分的含量根据每种指标成分供试品溶液高效液相色谱图中各自的色谱峰峰面积，根据已建立的各指标成分的标准曲线，分别读出每种指标成分在其供试品溶液中的浓度，并分别按照下列公式计算出各指标成分在丹知青娥片中的含量，其中，补骨脂素含量％＝C补骨脂素*V1/M1*100％；异补骨脂素含量％＝C异补骨脂素*V1/M1*100％；补骨脂苷含量％＝C补骨脂苷*V2/M2*100％；异补骨脂苷含量％＝C异补骨脂苷*V2/M2*100％；丹酚酸B含量％＝C丹酚酸B*V3/M3*100％；芒果苷含量％＝C芒果苷*V4/M4*100％。