[发明专利]马链球菌兽疫亚种无血清厌氧高密度发酵培养工艺

摘要

本发明公开了一种马链球菌兽疫亚种无血清厌氧高密度发酵培养工艺，属于农业微生物领域。本发明依次通过TSA复苏冻干种子、在TSA琼脂斜面一级中培养、在TSB培养基进行二级种子培养、在无血清和葡萄糖的加富胰酪蛋白培养基中厌氧发酵，得到马链球菌兽疫亚种发酵高密度抗原。本发明通过不添加任何血清和葡萄糖、厌氧发酵培养的方法，进行工业放大生产研究，发酵抗原含量无降低，发酵过程中不用调整通气、控制溶氧，抗原含量高，工艺参数容易控制，减少补料；较现有发酵工艺稳定、生长速度快，易于实现马链球菌抗原的大规模高密度培养。同时提高菌株的免疫原性，提高疫苗的保护效果。

主权项

1.一种马链球菌兽疫亚种无血清厌氧高密度发酵培养工艺，其特征在于，包括步骤：1）取冻干的发酵种子菌用活化培养基活化，至单菌落长出；2）挑取单菌落至一级种子培养基，培养12‑16小时，得一级种子；所述一级种子培养基为添加有3‑8%成牛血清的TSA培养基；3）取一级种子并接种于二级种子培养基，培养至OD₆₀₀值达到0.4‑0.6，得二级种子；所述二级种子培养基为添加有3‑8%成牛血清的TSB培养基；4）以1%‑3%接种量将二级种子液转接至发酵罐中的发酵培养基进行发酵种子培养；调节pH至7.2±0.2，关闭进气阀和出气阀，保持罐体正压0.03‑0.05Mpa，搅拌速度为50‑150rpm；当OD₆₀₀值达到一定数值时停止发酵，收获菌液，得到马链球菌兽疫亚种发酵高密度抗原；所述发酵培养基为加富胰酪蛋白培养基。