[发明专利]筛选中华猕猴桃‘Hort 16A’后代优良品系多倍体植株的方法在审
| 申请号： | 201610579726.4 | 申请日： | 2016-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN106191267A | 公开（公告）日： | 2016-12-07 |
| 发明（设计）人： | 张汉尧;刘小珍;李升星;张先昂;刘艳艳;陈海 | 申请（专利权）人： | 西南林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 昆明科阳知识产权代理事务所 53111 | 代理人： | 孙山明;徐洪刚 |
| 地址： | 650224 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 筛选中华猕猴桃‘Hort 16A’后代优良品系多倍体植株的方法，涉及植物优良品系多倍体的筛选。本发明步骤包括：提取组培苗叶片的总RNA；RNA反转录为cDNA；选择二倍体与多倍体植株转录组中呈上调趋势的差异基因1～2个，以持家基因Elongation factor EC为内参基因，萤光定量PCR，绘制差异基因的扩增曲线和溶解曲线；选择差异基因；计算相对表达量，以差异基因为二倍体差异基因2倍以上的组培苗作为多倍体组培苗。本发明创新了多倍体倍性变异植株筛选理论和方法，为中华猕猴桃多倍体植株筛选提供了一种高效可行的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 筛选 中华 猕猴桃 hort 16 后代 优良 品系 多倍体 植株 方法 | ||
【主权项】：
筛选中华猕猴桃‘Hort 16A’后代优良品系多倍体植株的方法，包括以下步骤：（1）提取中华猕猴桃组培苗叶片的总RNA；（2）去除基因组DNA，再配制荧光定量PCR反应体系，将RNA反转录成cDNA，反转录产物用于PCR扩增；所述荧光定量PCR反应体系为：去除基因组DNA的反应液10μl、Oligo(dT)18(0.5ug/ul) 1μl、Random primer(0.1ug/ul)1μl、5×RT Reaction Mix 4μl、TUREscript H‑RTase/RI Mix0.8μl、RNase free H2O to final volume补充至20μl；反转录的反应条件设置为：25℃ 10min，42℃ 30min，85℃ 5min；（3）选择该品系二倍体与多倍体植株转录组中呈上调趋势的差异基因1～2个，并以持家基因Elongation factor EC为内参基因，配制荧光定量PCR反应体系，进行萤光定量PCR分析，采集荧光信号，绘制差异基因的扩增曲线和溶解曲线；（4）根据溶解曲线选择萤光定量PCR的差异基因；（5）以Elongation factor EC作为内参基因，采用2‑△△Ct法计算相对表达量，以差异基因为二倍体差异基因2倍以上的组培苗为多倍体组培苗。
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