[发明专利]从人胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法及其应用

摘要

本发明涉及从人胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法及其应用。具体地说，涉及从胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法，该方法包括以下步骤：将胎盘用基础平衡盐溶液反复冲洗表面，对胎盘进行消毒；用手术镊撕取胎膜外层羊膜置玻璃皿中，用基础平衡盐溶液清洗表面污血，剪碎成，小块；膜小块均匀贴于培养皿，羊膜上皮层朝下，晾干后，添加完全培养基，培养；2天后补液，继续培养；待能看到上皮细胞爬出，去组织，换液继续培养；待出现多处典型的上皮细胞群，局部融合率达90％时，进行传代培养；收获：用胰酶消化后收集细胞，计数，冻存，即得人羊膜上皮细胞。还涉及所制得的人羊膜上皮细胞以及其用途。本发明方法呈现说明书所述优点。

主权项

1.从胎盘羊膜制备人羊膜上皮细胞的方法，该方法包括以下步骤：(1)从胎盘样品采集盒中取出胎盘，置于白瓷盘中，使用基础平衡盐溶液反复冲洗表面，对胎盘进行消毒处理；(2)用手术镊慢慢撕取胎膜外层羊膜置于150mm玻璃皿中，使用基础平衡盐溶液反复清洗表面污血，剪碎成直径为5mm的羊膜组织小块；(3)羊膜小块均匀贴于100mm培养皿，羊膜上皮层朝下，晾干30‑60min后，缓慢添加完全培养基，没过组织；在37℃、5%CO2培养箱中培养；所述完全培养基包括：DMEM基础培养基、10%FBS、10mg/L表皮生长因子、0.01~0.05%硝酸硫胺和0.05~0.1%麦芽糖；(4)2天后补液，继续培养；待能够看到明显的卵圆形上皮细胞爬出，去组织，换液继续培养；(5)待出现多处典型的上皮细胞群，呈铺路石样紧密排列，局部融合率达90%时，进行传代培养；(6)收获：用胰酶消化液消化后收集细胞，计数，冻存，即得P1代的人羊膜上皮细胞，必要时对其进行传代培养。