[发明专利]一种鉴定裸鼹鼠线粒体细胞色素b基因的限制性片段多态性的方法及试剂盒

摘要

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种鉴定裸鼹鼠线粒体细胞色素b基因的限制性片段多态性的方法及试剂盒。本发明首次建立裸鼹鼠的线粒体细胞色素b基因DNA序列的限制性片段多态性，作为裸鼹鼠特定的DNA指纹，可用于裸鼹鼠的物种鉴定。

主权项

一种鉴定裸鼹鼠线粒体细胞色素b基因的限制性片段多态性的方法，包括：(a)提取基因组DNA；(b)扩增线粒体色素b基因：以步骤(a)提取的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，获取扩增产物；扩增线粒体细胞色素b基因的引物序列如下：，正向引物MtDNA‑F：CCATCCAACATCTCCGCATGATGAAA；反向引物MtDNA‑R：CCCCTCAGAATGATATTTGGCCTCA；(c)使用6种限制性内切酶对步骤(b)中获取的扩增产物进行酶切，获取相应的酶切产物；其中，所述6种限制性内切酶为Alu Ⅰ、Hinf Ⅰ、HaeⅢ、Taq Ⅰ、Rsa Ⅰ以及Mbo Ⅰ；(d)将酶切产物采用3％的琼脂糖凝胶进行电泳，若线粒体细胞色素b基因DNA序列的多态性片段大小bp如下所示，即鉴定该物种为裸鼹鼠；Alu Ⅰ：358Hinf Ⅰ：311、47HaeⅢ：225、111、22Taq Ⅰ：228、130Rsa Ⅰ：238、88、32Mbo Ⅰ：213、114、31。