[发明专利]一种磁性凝集素载体的制备方法及其应用

摘要

本发明属于全细胞固定化领域，公开了一种磁性凝集素载体的制备以及在全细胞高效固定化中应用的方法。本发明技术方案的关键在于通过多巴胺盐酸盐对磁性纳米粒子进行修饰，通过表面带有的醌基和氨基功能性基团与凝集素共价结合。该载体表面积较大，且制备方法简单。本发明采用了重组E.coli为全细胞，磁性凝集素为载体用于固定化，且固定化率可达80‑90％。因此，制备该磁性凝集素载体用于固定化全细胞的方法为研究高效固定化提供了新的思路且具有一定的研究意义。

主权项

一种磁性凝集素载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将FeSO4·4H2O和FeCl3·6H2O按照摩尔比1:1～1:5溶于蒸馏水中，然后转移至三颈圆底烧瓶中，在40～80℃，搅拌和氮气保护条件下，迅速加入10‑40％的NH4OH调节溶液至碱性，反应5‑20min后，加入油酸，再搅拌反应25‑50min后，获得的黑色沉淀用无水乙醇和超纯水反复清洗至上清液无色透明，强磁铁沉淀分离，于真空烘箱中烘干，得到油酸磁性纳米颗粒称为Fe3O4@OA；(2)称取一定量的多巴胺盐酸盐溶解于缓冲溶液中，配制成1～10mg/mL的多巴胺盐酸溶液，将步骤(1)制备的油酸磁性纳米颗粒研磨均匀加入到多巴胺盐酸溶液中，超声10～50min，然后置空气中搅拌7～12h，搅拌结束后，用磁铁分离，获得的深棕色沉淀用乙醇和蒸馏水清洗，于真空烘箱中烘干，得到磁性纳米颗粒称为多巴胺功能化磁性纳米载体，记为Fe3O4@OA@DP；(3)将刀豆凝集素conA溶解于结合缓冲溶液中，得到一定浓度的刀豆凝集素conA储备液，取一定浓度的储备液，加入到步骤(2)中制备的Fe3O4@OA@DP纳米粒子中进行反应，反应结束后离心除去上清液，得到Fe3O4@OA@DP@conA磁性载体。