[发明专利]一种基于石墨烯、硫堇和核酸适配体检测甲胎蛋白的方法

摘要

一种基于石墨烯、硫堇和核酸适配体检测甲胎蛋白的方法，采用电沉积技术在丝网印刷电极表面沉积纳米金，通过静电吸附作用将滴在电极表面的石墨烯和硫堇吸附到丝网印刷电极表面，利用硫堇作为桥分子捕获核酸适配体到修饰电极表面。利用石墨烯巨大的比表面积和信号放大作用，利用硫堇对适配体的高负载能力以及适配体对甲胎蛋白的特异性识别作用，建立能特异性检测甲胎蛋白水平的纳米适配体生物传感器。通过差分脉冲伏安法检测出峰值电流，并描绘出该电流与甲胎蛋白浓度的关系曲线，实现对甲胎蛋白的检测，达到时间短，成本低，特异性高。

主权项

1.一种基于石墨烯、硫堇和核酸适配体检测甲胎蛋白的方法，包括以下步骤进行：步骤1：丝网印刷电极预处理将丝网印刷电极置于H₂SO₄溶液中进行循环伏安扫描， 活化电极表面后得到活化后的丝网印刷电极，用蒸馏水冲洗干净；其特征在于，还包括：步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建（1）将活化后的丝网印刷电极置入0.01%HAuCl4溶液中，进行电位沉积；所述电位沉积条件为‑0.5 V，沉积时间120 s，沉积结束后用蒸馏水冲洗干净；（2）取制备好的氧化还原石墨烯（RGO）溶液修饰到电极表面，烘干，得到石墨烯修饰电极；滴加硫堇溶液到石墨烯修饰电极上，晾干，得到硫堇/石墨烯修饰电极；（3）移取甲胎蛋白适配体滴加于硫堇/石墨烯修饰电极表面上，放置于恒温箱中孵育，用PBS缓冲液冲洗掉未能固定到电极上的适配体，滴加BSA溶液封闭电极，置于4℃冰箱中备用，该适配体传感器制备完成；步骤3：甲胎蛋白AFP标准曲线的绘制（1）在步骤2得到制备好的适配体传感器，在其上滴加AFP溶液，把电极放置在恒温箱中孵育，反应时间为30‑90分钟，用缓冲液将电极表面冲洗干净；（2）将电极放入PBS溶液中，进行差分脉冲伏安法扫描，记录峰值电流；（3）根据峰值电流的大小，绘制AFP的标准曲线，计算灵敏度和检测限；步骤4：待测样品的检测（1）在步骤2得到的制备好的适配体传感器表面，滴加待测样品， 把电极放置在恒温箱中，反应时间为30‑90分钟，用缓冲液将电极表面冲洗干净；（2）将电极放入PBS溶液中，进行DPV扫描，记录峰值电流；（3）根据步骤3所述标准曲线，得到所述待测样品溶液中AFP的浓度。